Gratias tibi ago pro natura.com adire.Versio navigatoris utens quam subsidia limitata CSS habet.Ad optimam experientiam commendamus ut navigatro renovato uteris (vel inactivare Compatibilitas Modus in Penitus Rimor).Interea, ut subsidia continua conservent, locum sine stylis et JavaScript reddemus.
Gene vectores ad tractationem fibrosis cysticae pulmonis iaculis debent ad airway conductivos, quia transductio pulmonis peripherici nullum effectum therapeuticum habet.Efficacia translationis viralis directo tempore ferebat residentiae coniunctam.Tamen humores partus tales sicut portatores gene in alveoli in inhalatione naturaliter diffundunt, et particulae therapeuticae cuiuslibet figurae celeriter a onerariis mucociliaribus remotae sunt.Residentiae porrectum tempus portantium generum in tractu respiratorii magni momenti est sed difficile assequi.Particulae magneticae tabellario-coniugatae quae ad superficiem tractus respiratorii dirigi possunt, scopum regionalem emendare possunt.Ob problemata cum imaginatione vivo, mores tam parvae particularum magneticarum in superficie airway in praesentia campi magnetici applicati male intelleguntur.Propositum huius studii erat ut synchrotron imaginatio in vivo motu seriei particularum magneticarum in arteria anesthetizatorum muribus uteretur ad investigandum dynamica et exemplaria agendi singularum et mole particularum vivorum.Tunc etiam aestimavimus utrum traditio particularum magneticarum lentiviralis coram campo magnetico efficientiam traductionis in rat arteriae augeret.Imaginatio Synchrotron X-radius mores particularum magneticarum in stationariis et campis magneticis movendis in vitro et vivo ostendit.Particulae per superficiem airum viventium magnetum utentium viventium facile trahi non possunt, sed in transvehendo deposita coacta sunt in prospectu, ubi campus magneticus fortissimus est.Transductionem efficientiam etiam sexplicem augebat cum particulae magneticae lentivirales coram campo magnetico liberatae sunt.Simul sumpti, hi eventus suggerunt particulas magneticas lentivirales et agros magneticos esse pretiosos aditus ad meliorem generum vectorem targeting et traductionis gradus in aere conductivo in vivo.
Cystica fibrosis (CF) causatur ex variationibus unius gene (CFTR transmembranae conductance vocato CFTR).Dapibus CFTR est canalis ion qui in multis cellulis epithelialibus per totum corpus adest, inclusis airlines, locus maior in pathogenesis fibrosis cysticae.Vitia in CFTR ducunt ad abnormalem aquae onerariam, siccitatibus superficiei aerias, et minuuntur superficies fluidi iacui airway (ASL) profunditatis.Etiam facultatem onerariis mucociliaris (MCT) corrumpit ad purgandas aerumnas particularum attractarum et pathogenarum.Propositum est methodos geneticae lentiviralis (LV) geneticae curationis corrigere exemplar CFTR gene et ASL, MCT et pulmonis sanitatem emendare, ac novas technologias evolvere, quae hos parametros vivo1 metiri possunt.
LV vectores sunt unus e primoribus candidatorum cysticorum fibrosis gene therapiae, praesertim quia constanter possunt integrare gene therapeuticam in cellulas basales airway (cellularum caulis airway).Hoc magni momenti est quod possunt restituere normalem hydrationem et alvi muci alvi differentiando in cellulas superficiei aeris gene correctas functiones cum fibrosi cystica consociatas, inde in beneficiis perpetuam.LV vectores contra airvios conductivos dirigi debent, sicut hic est ubi pulmonis implicatio in CF incipit.Partus vectoris altius in pulmonem in transductione alveolaris provenire potest, sed haec effectum therapeuticum in fibrosis cysticis non habet.Attamen humores ut cariatores gene in alveolos post partum 3,4 et particulas therapeuticas in cavitatis oralis MCTs celeriter expelluntur.Efficax translationis LV directe comparatur ad longitudinem temporis, vector prope cellulas scopo remanet ut cellulosa upactio - "temporis commorationis" 5 permittat, quae facile minuitur per auram regionalem typicam necnon ad susceptionem partium muci et MCT ordinatae.Nam fibrosis cystica, facultas commorationis LV tempus in air- viis prorogandi momenti est ad altas translationis gradus in hac provincia consequi, sed hactenus provocans.
Ad hunc cratem superandum, proponimus particulas magneticas LV duobus modis complementariis adiuvare posse.Primo, possunt duci a magnete ad superficiem airway ad emendandum targeting et auxilium gene ferebat particulas esse in area recta airway;et ASL) moventur in stratum cellularum 6. MPs late adhibentur ut iaculis medicamentorum vehiculorum partus, cum ligant ad corpora elementorum, chemotherapyarum medicamenta, vel alia parva molecula quae ad membranas cellulas attinent vel ligant ad receptacula sua cuiusque cellae superficiei et cumulant in locis tumoris. praesentia electricitatis statice.Agrorum magneticorum pro therapia cancer 7. Aliae methodi "hyperthermici" tenduntur ad necandos cellulas tumores MPs calefaciendo, cum campis magneticis oscillantibus expositi.Principium transmissionis magneticae, in quo campus magneticus uti agens transfectio ad augendam translationem DNA in cellas, vulgo in vitro adhibetur vector generum generum non viralium et viralium pro difficilibus ad lineas cellulas transducendas. ..Efficax LV magnetotransfection cum traditione LV MP in vitro in linea cellae epithelii bronchialis humani in praesentia campi magnetici static erecta est, augens efficientiam translationis ab 186 temporibus comparato cum solo LV vectore.LV MT etiam ad exemplar fibrosis cystici vitro adhibitum est, ubi magnetica transfectio augetur LV transductionem in culturas interfaciei liquidi aeris factore 20 coram fibrosis cysticis sputum10.Attamen magnetotransfectio organi vivo in comparatione parum attentis accepit et solum in paucis studiis animalis aestimatum 11,12,13,14,15, praesertim in pulmone 16,17.Sed possibilitates transmissionis magneticae in therapia pulmonis in fibrosis cysticis clarae sunt.Tan et al.(2020) affirmavit "convalidationis studium de partus efficax partus pulmonis magneticae nanoparticularum viam sternere futurae CFTR inhalationis consilia ad meliores eventus clinicos aegros fibrosis cystici" VI.
Mores particulae magneticae parvae in superficie tractus respiratorii coram campo magnetico applicato difficilis sunt ad visualizandum et ad studium, et ideo perspecta sunt.In aliis studiis elaboravimus synchrotron Propagationis Phase Substructio Phase Imaging Contra X-Ray Imaging (PB-PCXI) methodum imaginandi et quantitatis minuti in vivo mutationibus in profunditate ASL18 et MCT19 morum, 20 ut directe metiatur alveum gasi superficiei hydrationis. et adhibetur ut curationis efficaciae indicator maturescens.Praeterea methodus nostra MCT scoring adhibet 10-35 µm particulis diametris ex alumina seu indice vitreo refractivo alto composito ut MCT figuli visibiles cum PB-PCXI21.Utraeque modi aptae sunt ad imaginandas varias particulas species, in iis MPs.
Ob altitudinem spatii et temporalem resolutionem nostram PB-PCXI-substructio ASL et MCT pertentare bene apta sunt ad studia dynamica et modus vivendi exemplaria simplicium et mole particularum in vivo ad adiuvandum nos intelligendos et optimize MP gene partus modos.Accessus hic utimur fundatur in studiis nostris radiophonico-8 BL20B2 utendo, in quo motus fluidi subjicimur sequentes traditionem dosis phantastici vectoris in nasi et pulmonis airviorum murium ad auxilium explicandum exemplaria nostra heterogenea expressionis gene in nostro gene.studia animalis cum tabellario dose of 3.4 .
Propositum huius studii erat ut synchrotron PB-PCXI ad visualizandum in vivo motu seriei MPs in arteria mures inclusi.Haec studia imaginandi PB-PCXI destinata sunt ad explorandam MP seriem, campum magneticum virium, et situm ad effectum suum in MP motu determinandum.Nos posuimus agrum magneticum externum MF manente liberato iuvare vel ad aream scopo movere.Haec studia etiam nobis permiserunt determinare figurarum magnetem quae in arteriae relictae post depositionem augent.In secunda studiorum serie, hac optimali configuratione uti ad demonstrandum exemplar translationis ex vivo traditione LV-MPs ad rat airways, supposito quod traditio LV-MPs in contextu scopuli airway sequeretur. in augenda LV traductionis efficientia..
Omnia studia animalium secundum protocolla ab Universitate Adelaide probata (M-2019-060 et M-2020-022) habita sunt et Synchrotron Ethicorum Animalium SPing-8 Committee.Experimenta facta sunt ex laudatis ADVENIO.
Omnes imagines x-radii ad BL20XU trabem in SPring 8 synchrotron in Iaponia desumptae sunt utentes paro similes illis qui antea descripti sunt 21,22.Breviter, arca experimentalis posita erat 245 m e anulo synchrotronis repositionis.Specimen ad detectorem distantiae 0,6 m adhibetur pro particula imaginandi studiorum et 0,3 m nam in studiis imaginandi vivo ad Phase effectus contrahendos efficiendos.Trabs monochromatica cum industria 25 keV adhibita est.Imagines comparatae sunt utens summus resolutionis transductoris X-radii (SPring-8 BM3) detectoris sCMOS copulatorum.Transductor convertens X-radios ad lucem visibilem utens 10 µm crassum scintillatorem (Gd3Al2Ga3O12), quod tunc ad sensorem 10 (NA 0.3) microscopii obiectivum dirigitur.sCMOS detector erat Orca-Flash4.0 (Hamamatsu photonica, Iaponia) cum ordinata magnitudine 2048 × 2048 elementa et pixel rudis magnitudinis 6.5 × 6.5 µm.Hic occasus dat efficacem pixelli isotropici magnitudinem 0.51 µm et campum prospectus inter 1.1 mm × 1.1 mm.Expositio durationis 100 ms electa est ad augendum ratio particularum magneticarum intra et extra aerium signum ad tumultum, dum motus artificiales extenuando exspirando causavit.In studiis enim vivo, adapertorium ieiunium X-ray positum est in via X-radii ad limitandam dosis radialem, claudendo trabem X-radii inter ereptiones.
LV instrumentis non adhibitis in studiis imaginandi aliquo SPing-8 PB-PCXI quia BL20XU cubiculum imaginationis Biosafety Level 2 non est certificatus.Sed ex duobus mercatoribus mercatorum magnitudinum, materiarum, concentuum ferrearum et applicationum amplitudines MPs delegimus, ut intelligamus quomodo campi magnetici motum MPs in capillaribus vitreis afficiant, deinde in Vivamus porttitor.superficiem.Magnitudo MP variat ab 0.25 ad 18 µm et fit ex variis materiis (vide Tabula 1), compositio autem cujusvis exempli, incluso magnitudine particularum magneticarum in MP, ignota est.Ex nostris amplis studiis MCT 19, 20, 21, 23, 24, exspectamus MPs usque ad 5 µm in superficie arteriae aëreae videri posse, exempli gratia, subtrahendo continuos tabulas ad meliorem visibilitatem motus MP.Una MP 0,25 µm minor est quam resolutio machinae imaginativae, sed PB-PCXI expectatur ad deprehendendas discrepantias volutricas et motum liquidi superficiei in quo depositae sunt depositae.
Exemplaria cuiusque MP in schemate.1 praeparatum est in 20 µl capillariis vitreis (Drummond Microcaps, PA, USA) cum diametro interna 0,63 mm.Particulae corpusculae in aqua praesto sunt, dum CombiMag particulae in liquore proprietatis fabricae praesto sunt.Uterque tubus dimidius liquore (circiter 11 µl) repletus est et in specimen possessor positus (vide figura 1).Capillares vitreae in thalamo imaginativae in scena horizontaliter positae sunt, respective et ad margines liquidi positi.A 19 mm diametro (28 mm longum) Magnes nickel-testa terrae rarae, neodymium, ferrum et boron (NdFeB) (N35, cat. no. LM1652, Jaycar Electronics, Australia) cum remanentia 1.17 T adnexum est. mensam transferre separatam ad obtinendum Remotius mutare statum tuum in reddendo.X-radius imaginatio incipit cum magnes circiter 30 mm supra specimen et imagines ad 4 tabulas per secundam positas acquiruntur.Per imaginationem, magnes prope tubum capillarium vitreum (ad distantiam circiter 1 mm) adductus est et deinde per tubum movetur ad effectum agri virium et positionis perpendendum.
An in vitro imaginatio setup continens exempla MP exempla in capillaribus vitreis in stadio translationis xy exempli.Semita radii X-radii signatur linea punctata rubra.
Olim in vitro visibilitas MPs constituta est, subsessor eorum in vivo in speciebus feminae Wistar albino silvestribus probata est (~12 hebdomades annorum, ~ 200 g).Medetomidine 0.24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Iaponia), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Iaponia) et butorphanolum 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Mures anesthetizati cum Pharma (Japan) mixtione injectione intraperitoneali.Post anesthesiam imaginandi paratae sunt subtrahendo pilum circa trachiam, fistulam endotrachealem inserentes (ET; 16 Ga cannulam intravenosam, Terumo BCT), et immobilitantem in supina positione factae tabulae imaginandi in quo sacculum thermarum corporis temperamentum ponere.22. Lamina imaginativa tunc affixa erat ad specimen stadium in cista imaginativa ad angulum parvum ad tracheam horizontaliter align a imagine x-ray ut in Figura 2a ostenditur.
(a) In imaginatio vivo imaginatio in VI imaginatio fontis unitatis, semita X radius linea rubra punctata notata.(b, c) Magnes Trachealis localisation fiebat remote utens duobus orthogonalibus camerarum IP ascendentibus.In latere sinistro imaginis in velo, videre potes fasciam filum caput tenentem et cannulam partus intra ET fistulam inauguratus.
Remota systematis sentinae syringae moderata (UMP2, Instrumenta Mundi praecisio, Sarasota, FL) utens 100 μl clystere vitreo coniuncta erat cum PE10 tubingo (0,61 mm OD, 0,28 mm ID) utens 30 acus Ga.Nota tubum, ut tip in arteria arteriae recta positione inseratur.Micropump utens, clystere mersor remotus est et extremum tubi in MP sample liberandum immersus est.Tubus partus onustus tum in tubo endotracheali insertus est, ponens extremum ad validissimam partem campi magnetici expectati applicati.Imaginum acquisitio moderata est utens detectori nostro Arduino-substructio capsulae sincere coniunctae, et omnia signa (exempli gratia temperatura, respiratio, shutter apertum/propinquum, acquisitio imaginis) scripti sunt in usu Powerlab et LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22 Cum Imaging Cum habitationi pervulgata esset, duo IP camerae (Panasonicae BB-SC382) inter se circiter 90° positi sunt et positionem magnetis relativam ad arteriam in imaginatione temperare solebant (Figura 2b, c).Ad motum artificialium extenuandum, una imago per respirationem quaesita est in planitie fluens respiratorii terminalis.
Magnes secundo gradu adnectitur, qui remotius ab extra corpus imaginatio collocari potest.Magnetis positiones variae et figurationes probatae sunt, inter: angulum circiter 30° supra tracheam positae (configurationes in figuris 2a et 3a ostenduntur);unus magnes supra animali et alter infra, cum polis ad attractionem (Figura 3 b).magnes unus supra animali et infra, cum polis pro repulsione positus (Figura 3 c), et unus magnes supra et perpendicularis tracheae (Figura 3d).Postquam animal et magnetem statuo et MP sub experimentis in clysterem sentinam levatis, dosem 50 µl ad ratem 4 µl/sec tradet in acquisitione imaginum.Magnes igitur ultro citroque movetur vel per arteriam, dum imagines acquirat continuando.
Configuratio magnetis in imaginatione vivo (a) magnetis uno supra tracheam ad angulum circiter 30°, (b) magnetes duo ad attractionem conformati, (c) magnetes duo ad repulsionem conformati, (d) unus magnes supra et perpendicularis. arteriam.Spectator prospexit ab ore ad pulmonem per arteriam et trabs X radius per latus sinistrum rat et exivit latus dextrum.Magnes vel per longitudinem airviae vel sinistri et dextri super arteriam movetur ad directionem trabis X radius.
Voluimus etiam determinare visibilitatem et conversationem particularum in airway in absentia mixtionis respirationis et cordis.Itaque, in fine imaginis periodi, animalia humaniter euthanizata sunt propter dosi pentobarbitalem (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Transitus, USA; ~65 mg/kg ip).Quaedam animalia in suggestu imaginativae relictae sunt, et post cessationem respirationis et pulsationis, iteratus est processus imaginatio, addito dose MP, si nulla MP in superficie air- viae conspicua esset.
Imagines inde in campum campum planum et obscurum correcti sunt ac deinde in pellicula convenerunt (20 tabulae secundae per secundam; 15-25 celeritate normali secundum ratem respirationis pendentes) utens more scripto scripto in MATLAB (R2020a, The Mathworks).
Omnia studia in LV partus gene vectoris in Universitate Adelaide Laboratory Animal Research Centrum deducti sunt et ad experimentum SPring-8 utendum ad perpendendum an partus LV-MP in praesentia campi magnetici gene translationis vivo augere posset .Ad aestimandos effectus MF et campi magnetici, duo genera animalium tractati sunt: ​​alter globus cum LV MF cum magnete collocatione injectus est, alter globus cum LV MF sine magnete globus injectus est.
LV vector gene generati sunt utentes modos antecedentes 25, 26 .LacZ vector significat nuclei beta-galactosidase locales gene acti a promotore constitutivo MPSV (LV-LacZ), qui efficit reactionem caeruleam in cellulis transductis, conspicuam in frontibus et sectionibus textus pulmonis.Titratio in culturas cellularum fiebat sub numero cellularum LacZ-positivarum manually computando utens hemocytometro ad titulum in TU/ml computandum.Portitores ad -80°C conservati sunt, prior usus dilapsa, et CombiMag admixtis 1:1 et incubans glacie per XXX minuta saltem ante partum.
Normal Sprague Dawley mures (n = 3/group, ~ 2-3 anesthetized ip mixtis ex 0.4mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) et 60mg/kg ketamine (Ilium, Australia) ad 1 mensem) ip. ) iniectio et cannulatio non chirurgica cum 16 Ga cannula intravenosa.Ut trachealis textus airway transductionem LV recipiat, conditionata fuit utens protocollo nostro antedicto perturbationis mechanicae in qua superficies arteriae airway axialiter cum filo cophino defricabatur (N-Circle, lapis nitinol extractor sine apice NTSE-022115 ) -UDH , . Coquus Medical, USA) 30 p28.Deinde circiter 10 minuta post perturbationem scriniorum biosafetyrum, administratio trachealis LV-MP facta est.
Campus magneticus in hoc experimento usus configuratus est simili studio in vivo x-ray, cum magnetes tracheae cum distillationibus fibulis emissis (Figura 4).Volumen 50 µl (2 x 25 µl aliquots) LV-MP trachiae (n = 3 animalium) redditum est utens fistula gel-iuncta, uti antea.Circulus imperium (n = animalium) idem accepit LV-MP sine usu magnetis.Post infusionem peractam, cannula ab tubo endotracheo tollitur et animal extubatur.Magnes in loco per 10 minutas antequam remotus manet.Mures cum meloxico (1 ml/kg) (Ilium, Australia) subcutanee dostae sunt, sequebantur anesthesiam recessum per iniectionem intraperitonis 1 mg/kg atipamazolam hydrochloridi (Antisedan, Zoetis, Australiae).Mures calefiebant et servabantur usque ad plenam recuperationem ab anesthesia.
LV-MP fabrica partus in scrinio biologico salutem.Videre potes lucem griseam Manicam Luer-cincinni ET tubi ab ore extare, et apicem fistulae gel demonstratae in figura per ET fistulam ad altitudinem in arteriam desideratam inserendam.
Una septimana post processum administrationis LV-MP, animalia humaniter immolata sunt inspiratione 100% CO2 et LacZ expressio aestimata est utens vexillum nostrum curationi X-gal.Tres annuli caudalis cartilagines maxime sublati sunt ut aliquod damnum vel fluidum retentionis mechanicae ob collocationem tubi endotrachealis in analysi non comprehenderetur.Quaelibet arteria longitudinaliter abscissa ad duas medietates pro analysi obtinenda et in poculo in quo globulus silicone (Sylgard, Dow Inc) positus est utens acus Minutien (Instrumenta Fine Science) ad superficiem luminalem visualisandam.Distributio et indoles cellularum transductarum confirmata est per consequat frontalem utens microscopio Nikon (SMZ1500) cum camera digiti et programmatis TCapturae (Tucsen photonicis, China).Imagines ad 20x magnificationem acquisitae sunt (includendo maximum ambitum ad plenam latitudinem trachiae), cum tota longitudo trachiae gradatim exhibitae, satis inter singulas imagines incisa praebens ut imagines "sutilis" esse sinerent.Imagines ex unaquaque arteria tunc in unam compositam imaginem utentes composito Image Editor version 2.0.3 (Microsoft Research) utentes motu algorithmo plani. Area expressionis LacZ intra imagines compositas arterias ab unoquoque animali, quantitatae sunt utens automated scriptum MATLAB (R2020a, MathWorks) ut ante dictum est 28, utens occasus 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, et valor <0.7. Area expressionis LacZ intra imagines compositas arteriae ex unoquoque animali quantae utens automated scriptum MATLAB (R2020a, MathWorks) ut ante dictum est 28, utens occasus 0.35 < Hue < 0.58, Saturation 0,15, et valor <0.7. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. Area expressionis LacZ in imaginibus arteriae compositae ab unoquoque animali, quanta usus est scripto MATLAB automated (R2020a, MathWorks) sicut ante descriptus 28 utens occasus 0.35.0.15 et valorem< 0 .7.MATLAB R2020a，MathWorks）对来自每只动物的气管复合图像中的LacZ 0.35 < < 0.58、饱和度> 0.15 < 0.7Matlab r2020a Mathworks 0.35 <色调 <0.58 > 0.15 <0.7 HIP Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . Areas LacZ expressio in imaginibus compositis tracheae cuiusque animalis quantae sunt utens automated scripti MATLAB (R2020a, MathWorks) ut ante descripserat utens occasus 0,35 <hue <0.58, satietatem 0.15 et valorem <0.7.Venustates textus in GIMP v2.10.24 sequi, larva manually creata est ad imaginem quamlibet compositam ad cognoscendam aream textus, et ne quis extra texti arteriae falsas detectiones.Areae maculatae ab omnibus imaginibus compositae ex quolibet animali summae sunt ut darent totam aream maculatam illi animali.Area picta tunc divisa est per summam larvae aream ad normalitatem obtinendam.
Utraque arteria in paraffin immersa erat, et 5 µm crassus sectioned.Sectiones neutrae celeriter rubrae per 5 minutas et imagines acquisitae sunt utens microscopio, DS-Fi3 camera et NIS elementum capientis programmatis (versio 5.20.00).
Omnes analyses statisticae in GraphPad Prismate V9 factae sunt (GraphPad Software, Inc.).Significatio statistica posita est in p ≤ 0.05.Normalitas probata per Shapiro-Wilk experimentum et differentiae in LacZ maculas aestimatae sunt utens innuptae t-test.
Sex MPs descripti in Tabula 1 examinati sunt a PCXI, et visibilitas describitur in Tabula 2. Duo polystyrene MPs (MP1 et MP2; 18 µm et 0.25 µm, respective) a PCXI non visi sunt, sed reliqua exemplaria invenire potuerunt. (Exempla in Figura V).MP3 et MP4 aegre conspicui sunt (10-15% Fe3O4, 0.25 µm et 0.9 µm respective).Etsi MP5 (98% Fe3O4; 0.25 µm) aliquas minimas particulas probatas continebat, maxime pronuntiatum est.Productum CombiMag MP6 difficile est distinguere.In omnibus casibus, facultas nostra MFs deprehendendi valde melior est movendo magnetem citroque parallelam capillari.Cum magnetes a capillaribus moti, particulae longis catenis evulsae sunt, sed magnetes appropinquantes et campi magnetici vires auctae, catenulae particulae minuendae sunt ut particulae capillares versus superficiem superiorem migraverint (vide Supplem. Video S1 : MP4) densitas particula augens in superficie.Vicissim, magnete a capillare remoto, vires campi decrescit et MPs in longis catenis a superiori superficie capillarii productis (cf. Accessiones Vide S2: MP4).Postquam magnete sistitur, particulae post aequilibrium positionem aliquandiu moveri pergunt.Cum MP moveatur a superiore superficie capillaris, magneticae particulae per liquidum obruta tendunt.
Visibilitas MP sub PCXI aliquantum inter exempla variat.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5, (d) MP6.Omnes imagines hic ostensae deprehensae sunt cum magnete fere 10 mm supra capillari positi.Circuli magni apparentes sunt bullae aereae in capillariis comprehensae, perspicue ostendentes aciem nigram et albam lineamenta phase antithesis imaginis.Arca rubra significat magnificationem quae antithesin auget.Nota quod diametri magnetis circuli in omnibus figuris non sunt scalae, et sunt circa 100 tempora majores quam ostensi.
Ut magnes per verticem capillaris dextra laevaque movet, angulus MP chordae cum magnete pugno mutat (vide figuram VI), ita lineas campi magnetici delineans.Nam MP3-5, postquam chorda ad angulum limen attingit, particulae per superficiem capillarii superiorem trahunt.Hoc saepe evenit in MPs glomerantibus in majoribus coetibus prope ubi validissimus campus magneticus est (vide Accessiones Video S3: MP5).Hoc etiam maxime patet, cum imaginatio proxima ad finem capillaris, quae MP facit aggregationem et conducunt ad liquidum aeris interfaciem.Particulae in MP6, quae magis distinguuntur quam illae in MP3-5, non trahebant cum magnete capillaribus moti, sed chordae MP dissociatae, particulas in visu relinquentes (cf. Accessiones Vide S4: MP6).In quibusdam, cum campus magneticus applicatus reducendo magnetem longam distantiam ab imagine imaginandi, aliquae reliquiae MPs tardius descenderunt ad fundum superficiei tubi per gravitatem manentem in chorda (cf. Accessiones Vide S5: MP3). .
Angulus chordae MP mutatur sicut magnes ad dextrum supra capillarium.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5, (d) MP6.Arca rubra significat magnificationem quae antithesin auget.Quaeso note additamenta videos ad informationes propositas esse, cum demonstrant magni momenti particulam structuram ac dynamicam informationem quae in his staticis imaginibus subjici non possunt.
Nostrae probationes ostendimus magnetem ultro citroque movendum lente in arteriam faciliorem esse visualizationem MF in contextu motus complexi in vivo.Nullae in vivo probatio factae sunt quia globuli polystyrene (MP1 et MP2) in capillaribus non visi sunt.Uterque reliquorum quatuor MFs in vivo magnetis axe longo super tracheam in angulo verticali circiter 30° posito (vide figurae 2b et 3a) probata fuit, ut hoc in catenis MF longioribus consecutum et efficacius erat. quam magnes..configuratione terminabitur.MP3, MP4 et MP6 in arteriis animalium vivorum non inveniuntur.Cum tractus respiratorii mures cum humaniter trucidatis animalibus visualisando, particulae invisibilis manserunt etiam cum addito volumine additae sunt utentes clysterem sentinam.MP5 oxydatum ferreum summum contentum erat et unica particula visibilia erat, ut mores MP in vivo aestimare et denotare solebat.
Locus magnetis in arteriam per MF insertionem in multis consecuta est, sed non omnes, MFs in campum visum contracti.Ingressus trachealis particularum optime observatur in animalibus euthanizatis humaniter.Figurae 7 et Accessiones Video S6: MP5 ostendit rapidam magneticam captam et alignmentam particularum in superficie tracheae ventralis, ostendens MPs iaculis in locis arteriae desideratis posse.Cum per trachiam partus MF magis distraheretur, quaedam MFs propius ad carinam inventa sunt, quae vim campi magnetici insufficiens ad omnes MFs colligendos et retinendos indicat, cum per regionem maximam campi magnetici vim administrationis fluidae in administratione liberatae sint.processum.Autem, concentrationes MP postnatales circa imaginem aream altiores erant, significans multas MPs regiones in airway manere, ubi campus magneticus vires summae applicatae erant.
Imagines (a) ante et (b) post traditionem MP5 in trachia ratae euthanisatae recentis cum magnete positae mox supra aream imaginativam.Area depicta inter duos annulos cartilagineos sita est.Aliquis liquor in airways ante MP liberatus est.Arca rubra significat magnificationem quae antithesin auget.Hae imagines sumuntur e pluma in S6: MP5 Accessiones Video.
Magnetem per trachiam vivo movens consecuta est mutatio in angulo MP catenae in superficie aerea, quae in capillariis observata similis est (vide Figure 8 et Accessiones Vide S7: MP5).Tamen in studio nostro, MPs per superficies tractus respiratorii vivi tractari non potuerunt, sicut capillarii facere potuerunt.In quibusdam, MP catena extendit, sicut magnes laeva et dextera movet.Interestingly etiam invenimus catenam particulam immutare altitudinem iacuit superficiei fluidi cum magnes per trachiam longitudinaliter movetur, et dilatatur cum magnes directe movetur supra caput et catena particulae ad situm verticalem revolvitur (cf. Accessiones vide S7).: MP5 ad 0:09, deorsum rectum).Proprietas motus exemplaris mutatus est cum magnes lateraliter per trachiam verticem (id est, ad sinistram vel dextram animalis, quam per longitudinem arteriae) movebatur.Particulae adhuc in motu suo clare conspicuae erant, sed cum magnete trachia remoto, apices nervorum particulae visibiles factae sunt (vide Accessiones Vide S8: MP5, inde ab 0:08).Hoc convenit cum observatis moribus campi magnetici sub actione campi magnetici applicati in capillaribus vitreis.
Sample images showing MP5 in arteria anesthetized rat vivae.(a) Magnes adhibetur imagines supra ac ad sinistram arteriae comparandae, deinde (b) postquam magnetem ad dextrum movens.Arca rubra significat magnificationem quae antithesin auget.Imagines hae sunt e cinematographico in S7′ Supplementario Video: MP5.
Cum duo cardines in meridionali propensione supra et infra tracheam (id est trahens; Fig. 3b), chordae MP longiores apparuerunt et in pariete laterali tracheae magis quam in superficie dorsali locati sunt. arteriam (cf. appendicem).Vide S9:MP5).Attamen concentrationes altorum particularum ad unum locum (id est superficies trachiae dorsalis) non detectae sunt post administrationem fluidam utentem machinam magnetis duplicem, quod plerumque fit cum uno magnete artificio.Deinde, cum unus magnes configuratus est polos oppositos repellere (Figura 3 c), numerus particularum visorum in campo intuitu post partum non crevit.Utraque duarum figurarum magneticarum institutio provocat ob altam vim campi magnetici quae respective magnetes attrahit vel impellit.Proposita igitur mutata est uni magneti airvias parallela, sed per aerias vias ad angulum 90 gradum transiens, ita ut lineae virium trachealem murum orthogonaliter transeant (Figura 3d), orientatio intenditur ad determinandam possibilitatem particulae aggregationis in pariete laterali.notandus.In hac tamen configuratione, nulla MF cumulus motus vel motus magnetis identificabilis fuit.Ex omnibus illis proventibus, conformatio cum uno magnete ac XXX gradu orientationis electa est in studiis vivorum cariatorum generum (fig. 3a).
Cum multiplex temporibus statim post humane immolatum animal effigiatum est, absentia motus texti impedimento significabat, quod subtilior et breviores lineae particulae in campo intercartilagineo perspicuo cerni possent, vacillare secundum motum magnetis translationalem.clare vides praesentiam et motum particularum MP6.
Titre LV-LacZ erat 1.8 x 108 IU/mL, et mixtis 1:1 cum CombiMag MP (MP6), injecta sunt animalia cum 50 µl dosis arteriae 9 x 107 IU/ml vehiculorum LV (ie 4.5 x 106 TU/rat).).).In his studiis, loco magnetis movendi in labore, magnetem in uno loco statuimus ut si LV traductio emendari posset (a) comparatio vectoris in absentia campi magnetici, et si airway posset. feruntur.Cellulae traductae in scopum magneticum areas tractus respiratorii superioris.
Praesentia magnetum et usus CombiMag in compositione cum LV vectori non videntur adversare sanitati animalis, sicut vexillum nostrum LV vector protocollo partus fecit.Imagines frontales regionis trachiae perturbationi mechanicae subiectae (Supplem. Fig. 1) ostendebant catervam LV-MP tractatam habuisse signanter altiores gradus translationis coram magnete (fig. 9a).Tantum parva copia caerulei LacZ maculavit in globo regimine (Figura 9b).Quantitas regionum X-Gal-maculatarum normalizatarum monstravit administrationem LV-MP coram campi magnetici consecutam esse in emendatione circiter VI duplici (Fig. 9c).
Exemplum imaginum compositarum ostendens traductionem arteriam cum LV-MP (a) in praesentia campi magnetici et (b) in absentia magnetis.(c) Statistically significant emendationem in area normalized LacZ traductionis in arteriam cum usu magnetis (*p = 0.029, t-test, n = 3 per group, medium ± vexillum erroris medii).
Sectiones Neutrales celeriter rubrae maculatae (exemplum in Supplementario Fig. 2) significaverunt LacZ-maculatum cellulas in eodem exemplo adesse et in eodem loco, ut antea relatum est.
Clavis provocatio in gene therapia airway manet praecise localizationis ferebat particularum in locis usuris ac consecutio altae translationis efficientiae in pulmone mobili coram airflow et alvi muci agentis.Vehitores enim LV curationi morborum respiratorii in fibrosis cysticis destinati, residentiae tempus augentes partium vehiculi in aeroplanis conductivis hactenus propositum esse non potuerunt.Ut a Castellani et al. demonstratum est, usus agrorum magneticorum ad traductionem augendam utilitates habet in aliis methodis partus genee partus sicut electroporationis, quia potest simplicitatem, oeconomiam, partus locales, augere efficientiam, et incubationis tempore breviorem miscere.et fortasse inferioris dosis vehiculorum 10 .Attamen in vivo depositione et moribus particularum magneticarum in airways sub impressione virium magneticarum externarum numquam descriptus est, et revera capacitas huius methodi crescendi generum expressionis gradus in integris airmodis viventibus in vivo non demonstratum est.
Nostra experimenta in vitro de PCXI synchrotron demonstraverunt omnes particulas quas probavimus, excepto polystyrene MP, visibiles erant in imagine imaginati quo usi sumus.Coram agro magnetico, agri magnetici nervos formant, quorum longitudo ad genus particularum et ad robur campi magnetici (id est propinquitas et motus magnetis).Ut patet in Figura X, chordae quas videmus formantur, ut quaelibet particula magnetica fiat, et proprium campum magneticum inducat.Hi campi separati alias particulas similes colligendi et coniungendi cum motibus chordarum globi ob copias locales e viribus localibus attrahendi et repulsionis aliarum particularum faciunt.
Tabula ostendens (a, b) catenas particularum intus fluidas capillarias (c, d) aerem repletas arterias formantes.Nota quod capillaria et arteria in scalam non trahuntur.Panel (a) etiam MF continet descriptionem particularum Fe3O4 in vinculis dispositas.
Cum magnete supra capillarem ferebatur, angulus chordae particulae ad limina critica MP3-5 continens Fe3O4 pervenit, post quem particula chorda non amplius in suo situ mansit, sed per superficiem ad novum locum ferebatur.magnes.Hic effectus probabile evenit quia superficies vitri capillaris satis levis est ut hunc motum fieri sinat.Interestingly, MP6 (CombiMag) hoc modo non fecit, fortasse quia particulae minores erant, crimen tunicae vel superficiei diversam habebant, vel tabellarius proprietatis fluidi affectus suas facultatem movendi habebat.Contrapositum in CombiMag particula imaginis etiam debilior est, suggerens liquorem et particulas eandem densitatem habere ac propterea ad se invicem facile moveri non posse.Particulae etiam haerere possunt si magnes nimis celeriter moveatur, ostendens vim campi magnetici non semper superare frictionem inter particulas in fluido, suggerens vim magneticam et distantiam inter magnetem et scopo aream non venire. mirum.clarus.Hi eventus etiam indicant, licet magnetes multas microparticulas per scopo aream fluentes capere possint, probabile est magnetes posse fidendum esse ad particulas CombiMag per superficiem trachiae movendas.Sic in vivis studiis LV MF uti debere ut campis magneticis static, ad specificas areas arboris airway physice oppugnandas.
Postquam particulae in corpus traditae sunt, difficile est cognoscere in contexto complexi texti corporis moventis, sed capacitas eorum detectio emendatur movendo magnetem horizontaliter super arteriam ad chordas MP " CRISPICO".Cum imaginatio real-time possibilis sit, facilius discerni potest particula motus postquam animal humaniter occisum est.Concentraciones MP plerumque altissimae in hoc loco erant, cum magnes in area imaginatio positus, quamvis aliquae particulae adhuc deorsum arteriae solent reperiri.Dissimilis in studiis vitro, particulae motu magnetis arteriam detrahi non possunt.Inventio haec consentaneum est quomodo mucus, qui superficies trachiae operit, de particulis attractis processit typice, eas in mucum captare et postea per alvi mechanismum muco-ciliarem purgare.
Nos hypothesavimus magnetes supra et infra tracheam attractionis (Fig. 3b) uti posse in campo magnetico magis uniformi, quam in campo magnetico, in uno puncto valde compacto, potentia resultante in distributione particularum magis uniformi..Attamen studium nostrum praeliminans evidentes probationes ad hanc hypothesim sustinendam non invenit.Similiter par magnetes repellere (Fig. 3c) non euenit in particula plura in area imaginis habita.Hae duae inventiones demonstrant duplicem magnetem paroeciam localem potestatem MP demonstrandi non signanter emendare, et validas vires magneticae resultantes difficiliores cantu esse, accessionem minus practicam faciens.Similiter magnetem supra et per trachiam dirigens (Figura 3d) etiam numerum particularum in area imaginativa remanentium non augebat.Nonnullae harum alternationum figurarum bene possunt non esse, dum reductionem in vi campi magnetici in zona depositionis.Sic, unicus magnetis figuratio in 30 gradibus (Fig. 3a) simplicissima et efficacissima in methodo probata vivo consideratur.
Studium LV-MP demonstravit cum LV vectores cum CombiMag coniunctos esse et postquam physice turbatus est in conspectu campi magnetici, gradus traductionis auctus significanter in arteriae ad imperium comparata.Ex studiis imaginis synchrotron et LacZ consequitur, campus magneticus visus est LV in arteriam servare et numerum particularum vectoris, quae statim in pulmonem profunde penetrarunt, reducere posse.Talis emendatio targeting ad altiorem efficientiam ducere potest, dum titers liberatus minuit, transductionem non-tardata, inflammatoriae et effectus latus immunes, et gene translationis gratuita.Maxime, secundum fabricam, CombiMag adhiberi potest in compositione cum aliis methodis translationis generum, inclusis aliis vectoribus viralibus (ut AAV) et acida nucleica.