Giardia duodenum est organismus parasiticus qui giardiasim causat, contagio intestinorum praesertim communis in infantibus cum signis orci fluxus.Antea rettulimus extracellulares G. duodenalis trigger activationem receptoris intracellulares oligomerizationis 3 (NLRP3) ligaturae nucleotides et responsalitates inflammatorias per vesiculum extracellulare (EV) secretionis moderatur.Attamen exemplaria certa hypothetica ev (GEV) duodenococcalis in hoc processu implicata et partes NLRP3 inflammasimi in giardiasi elucidandae manent.
Recombinantes eukaryoticas expressiones plasmidas pcDNA3.1(+)-alpha-2 et alpha-7.3 giardines in GEV constructae, in pri- mus macrophages peritonaei pri- mus structae et detectae metiendo inflammatio scopo moleculae caspase-1.Locutio p20 gradu muniebatur..G. duodenalis alpha-2 et giardines alpha-7.3 primitus notatur mensurando NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 et caspase-1 p20), IL secretio.1β gradus, dapibus apoptoticis maculosus (ASC) gradus oligomerizationis, et localisatio immunofluorescentium NLRP3 et ASC.Munus inflammationis NLRP3 in pathogenicitate G. duodenalis tum usus murium aestimata est, in qua NLRP3 activitatem mures inclusit (NLRP3 mures obstructas) et pathologicae mutationes in pondere corporis, onere parasitico duodenali, et textus duodenalis monitoriis erant.Praeterea investigavimus num hiardines alpha-2 et alpha-7.3 inducunt secretionem IL-1β vivo per inflammationem NLRP3 et partes harum moleculorum in pathogenicitate G. duodenalis murium determinarunt.
Alpha-2 et alpha-7.3 giardines activationem inflammationem in vitro NLRP3 inducunt.Inde ad activum caspase-I p20, augmentum expressionis gradus NLRP3, pro-IL-1β, et servo-pro-caspase-1, notabile incrementum secretionis IL-1β, formatio ASA macularum in cytoplasmus et inductio ASA oligomerizationis.NLRP3 inflammatio Penilei detrimentum pathogenicum G. duodenalis in murium exacerbat.Mures cum cystis per gavagum ab NLRP3-obstructis muribus affecti exhibentes numerum trophozoitarum auctum et grave detrimentum villorum duodenali, cryptis necroticis cum exile et ramosis insignitum.In experimentis vivo docuerunt giardines alpha-2 et alpha-7.3 secretionem II-1β per inflammationem NLRP3 inducere, et immunizationem cum giardinis alpha-2 et alpha-7.3 pathogenicitatem G. duodenalis in muribus reducere.
Collatis eventus huius studii suggerunt giardia alpha-2 et alpha-7.3 upregulation hospitii inflammationem NLRP3 et infectio G. duodenalis in muribus minuenda, quae scuta pro giardiasi impediendo pollicentur.
Giardia duodenum extracellulare est parasitus protozoanus, qui in tenui intestino vivit et 280 miliones casuum giardiasis cum diarrhoea annuatim facit, praesertim inter infantes in regionibus evolvendis.Inficiuntur potatione aquae vel cibi cum M. anorum duodenis, quae in ventrem intrant et in succos gastrici excernuntur.Giardia duodenum trophozoitae epithelio duodenali apponunt, nausea, vomitus, diarrhoea, dolor abdominis et pondus damnum.Individua cum immunodeficientia et fibrosis cysticis sunt susceptibiles infectioni.Infectio etiam fieri potest per sexum oralem et ani.Medicamenta ut metronidazole, tinidazole et nitazoxanide praeferuntur optiones curationum pro infectiones duodenales[3].Sed haec medicamenta chemotherapy sunt adversa effectus in parte adversa, sicut nausea, carcinogenesis et genotoxicitas [4].Ideo magis elaborandum est ne G. duodenalis contagio efficacius strategies evolvatur.
Inflammasomes sunt genus complexorum interdum cytosolicorum quae pars responsionis immunis innatae sunt, adiuvantes ad defendendum contra invasionem invasionis et mediae responsiones inflammatorias [5].Inter haec inflammasomes, nucleotide-obligatio oligomerizationis (NOD) recepta 3 (NLRP3) nucleotide-obligatio oligomerizationis (NLRP3) nucleotide-obligatio inflammamo- rum late quaesita est quia variis pathogenis/dampnis associatis exemplaria hypothetica (PAMP/) deprehendi potest. umens), agnoscit, operatur immune ratio innata.intestinalem homeostasin multis inflammatoriis morbis temperat.Constat recognitionis exemplaris receptoris (PRR) NLRP3, adaptoris apoptotici dapibus maculosi (ASC), et effectoris procaspase-1 vel procaspase-11.NLRP3 inflammasome exercitati contra pathogen invasionis agit, ut in Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], et studia Leishmania.[11] Sed etiam relatum est quod activationem NLRP3 limitum inflammatiosorum tutelae responsiones immunes et progressionem morborum exacerbat, exempli gratia, in vermibus [12].Ex superioribus nostris inventionibus, extracellulares G. duodenalis triggers activationem intracellulares NLRP3 inflammationis et modulationis extracellulares responsiones inflammatorias, vesiculas extracellulares (EVs) secreto (EVs) narravimus.Attamen munus NLRP3 inflammationis in G. infectio duodenalis in vivo determinandum manet.
Giardins originaliter descripti sunt componentes structura G. cytoskeleton duodenalis et partes magni momenti in motilitate trophozoite et cellula epitheliali affixum in tenui intestino.Ut magis accommodare ad ambitum et augendam suam pathogenitatem, G. trophozoites duodenalis evolvit unica structura cytoskeletalis constans ex 8 flagella, 1 corpore medio, et 1 discus ventralis [14].Trophozoites Giardiae duodeni cytoskeleton suo utuntur ad intestinum superius tenue, praesertim duodenum, penetrandum et ad enterocytas adiungunt.Constanter migrant et cellulis epithelialibus utentes metabolismi cellularum applicant.Arcta igitur necessitudo est inter cytoskeleton et virulentiam.Giardines specificae pro Giardia duodenum sunt componentes structurae cytoskeleton[15], et in quattuor classes divisae: α-, β-, γ-, giardines.Sunt 21 membra familiae α-giardinae, quae omnia facultatem habent calcium dependentem ad ligandum phospholipidas [16].Etiam cytoskeleton membranae cellae coniungunt.In singulis cum diarrhoea a G. duodenali causata, α-Gardinae valde exprimuntur et immunoreacivae in infectione [17].Vaccina heterologa in Giardia alfa-1 contra giardiasim murium tutata sunt et candidati potential antigenis ad progressionem vaccinum pertinentes [18].Alpha-8 giardin, in plasma membrana et flagella locata, non autem in disco ventrali, mobilitatem et incrementum rate trophozoitis in G. duodenalis auget [19].Alpha-14 giardin structurae microtubulae in flagella affixit et viability G. duodenalis afficit [20].Alpha-11 giardine affatim adest per totam vitam cycli, ac overexpression alpha-11 giardine damnorum G. duodenalis se [21].Incertum tamen est an giardine alpha-2 et giardine alpha-7.3 sint tutelae contra G. duodenales contagiones earumque machinationes subiacentes.
In hoc studio, recombinante expressio eukaryotica plasmids pcDNA3.1(+) -alpha-2 giardina et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardina in pri- mus macrophages peritonaeos ad excitandum exercitum NLRP3.Scuta inflammatoria tunc tegebant.Etiam munus inflammatiosorum NLRP3 in pathogenicitate G. duodenalis aestimavimus, investigavimus an giardines alpha-2 et alpha-7, NLRP3 inflammatiosorum in vivo inducunt activum, ac decernimus has duas partes giardinarum in pathogenicitate G. duodenalis.Communis propositum nostrum erat ut scuta promittentes pro infectio G. duodenalis impediretur.
Genus silvestris (WT) C57BL/6 mures feminae 5-8 annorum emptae sunt ab Liaoning Changsheng Experimentalis Animal Centre (Liaoning, China).Mures liberum accessum ad aquam habebant, venenatis cibum accepti et in luce XII/XII horae / cycli obscuri tenebantur.Priusquam infectio, mures antibioticos ad libitum in aqua bibendo cum ampicillino (1 mg/mL), vancomycin (1 mg/mL), et neomycin exceperunt (1.4 mg/mL) (omnia empta a Shanghai, Sinis, organismis artificialibus) [22. ].].Mures qui facultatem manducandi et bibendi amiserunt pro > 24 horis et ≥ 20% pondus corporis amiserunt humaniter euthanati sunt a motu cervicali.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) suppleta sunt 12.5% ​​foetus serum bovinum (FBS; Omne Green, Zhejiang, China) et 0.1% bile bovinum (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA ).USA) sub conditionibus microaerobicis.Trophozoitae confluentes in glaciem coacti sunt et passi ad rationem 1:4 ad ulteriorem reproductionem.
Giardia duodenum anorum inductae, uti antea [23], trophozoitae in logarithmica periodo exitu sunt ac deinde cum encapsulatione diluti medium inducentes, pH 7.1 (mutata TYI-S-33) ad ultimam intentionem 1 106 trophozoitis/mL.detentio bilis 0.05% media).Trophozoitae sub anaerobicis conditionibus exculti sunt ad 37°C usque ad incrementum logarithmicum.Muta medium ad cystam inducentem (pH 7.8; medium TYI-S-33 mutatum cum unione bili 1%) et cultura G. duodenalis ad 37°C pro 48-96 horarum, in qua formatio anorum sub microscopio observabantur.Postquam plerique trophozoitarum ad formandas cystas inductae sunt, cultura mixtura deionizata in sterili aqua deionizata sumta est, ut reliquas trophozoitas interficeret.Cystae numeratae et conditae sunt ad 4°C propter analyses subsequentes per tubum gastricum in muribus.
Giardia vesiculae extracellulares (GEVs) ditati sunt ut antea [13].Trophozoites in incremento logarithmico resuscitati sunt in medium mutatum TYI-S-33 praeparatum cum exosome-leutatis FBS (Biologicae Industriae, Beit-Haemek, Israel) ad ultimam intentionem 1× 106 parasitorum/mL et per 12 horas incubatis.semotus a cultura supernatante per centrifugationem ad 2000 g pro 10 min, 10,000 g pro 45 min, et 100,000 g pro 60 min.Praecipitationes dissolutae sunt in phosphate buffered salino (PBS), quantitatis instrumenti utentes BCA dapibus primordium (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) et in -80° C. repositae vel directe ad analyses ulteriores adhibita.
Macrophages peritonaei pri- mus paratae sunt ut antea descriptum [24].Breviter, mures (intraperitonealiter [ip]) injecti sunt cum 2.5 ml 2.98% difco liquidum thioglycol medium (BD, Franklin Lacus, NJ, USA) et palata 3—4 alui.Suspensio macrophages ex cavitate murium abdominis post euthanasiam et centrifugas 3 vicibus ad 1000 g pro 10 min colligebatur.Cellulae deprehensi sunt cytometriae fluxus utentes ad CD11b titulum usque ad cellam puritatem >98%, deinde ad 6-bene cellulae culturae laminae (4.5 x 106 cellae/bene) incubatae cum 10% FBS (Bioindustry) ad 37°C.et 5% CO2.
RNA extractum est ex 1 107 trophozoitis in 1 ml Trizol gerentis (Vazyme, Nanjing, China), genomic DNA e summa G. duodenalis RNA extractum utens MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) et complementum DNA (cDNA) summatim perstringitur. usura MonScript RTIIII Super Mix (Monad) secundum fabrica instructions.
CDS series informationes pro scopo G. duodenalis gene a NCBI GenBank consecuta est.Utere primario 5.0 ad designandum primers specificam inconsutilem exquisitam pro scopo gene singulis.Prior prior (5′-3′) tribus constat partibus: sequentia imbricata cum vectore lineari pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) et committitur codons ATG et GNN (si prima basis G non est).Hoc fit ut efficaciam locutionis emendare possit.Insuper basium saltem 16 bp conjunctarum (contentio GC 40-60%/Tm approx. 55 °C).Contrarium primarium (5′-3′) duabus partibus constat, serie imbricata cum vectore EcoRV-linearizato pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) et basis compositae saltem 16 bp.(exclusis duobus ultimis clausuris).bases) codon sicut AA vel GA ut plasmidas recombinantes permittant ad exprimendos suos intitulatos servos).Sequentiae primae in Tabula 1 recensentur et summatim per Kangmet Biotechnologiam Co., Ltd. (Changchun, China).
scuta ampliata sunt polymerasi Pfu DNA (Tiangen, Beijing, China) vel Ex-taq (Takara Technologia Biomedica [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) utens parata G. duodenalis cDNA in exemplum.Expressio eukaryotica vectoris plasmidis pcDNA3.1(+) erat linearised cum restrictione enzyme EcoRV et dephosphorylatae utens Fast AP (Thermo Fisher Scientific).Fragmenta linearizata pcDNA3.1(+) fragmenta et amplificata scopo gene fragmenta purificata utens ornamentum purgationis DNA gel (Tiangen) et quantitatis usus Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).In pcDNA3.1(+) fragmentum et singulae scopo gene fragmenti recompositae sunt utens MonClone unico conventu mixto (Monad Biotech Co, Ltd., Suzhou, China) et confirmatur DNA sequencing utens Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China)..
Endotoxin-plasmids gratis pcDNA3.1(+)-alpha-2 et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 generati sunt utentes SanPrep Endotoxin libero Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech).Contentio supra 500 ng/µl conservata est ut EDTA in elutionis quiddam impediret cum transfection primordium.Pri- mus peritonaei macrophages in 6-bene bracteis integris RPMI 1640 exculti sunt mediae (Biologicae Industriae) per 12 horas, tunc cellulae 3 temporibus in calidis PBS lavabantur ut penicillinum et streptomycinum removerent, et dein in medio cum medio perfecto supplerentur.Endotoxin-plasmidarum liberorum pcDNA3.1(+)-alpha-2 et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) diluta sunt in 125 µl Opti-MEM redacti serum medium (Gibco, Thermo Fisher Scientificum)..Tunc 5 µl de Lipofectamine 2000 transfectionis reagens (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) dilutum est in 125 µl seri vilis Opti-MEM medii.Complexa liposome-DNA para mixtionem endotoxini liberorum plasmidum cum Lipofectamine 2000 mixtum et permittens mixtionem stare in cella temperatura per 5 minutas.Complexa seorsim transfer ad cellulas in unoquoque puteo et lente misce.Post 4 horas, medium culturae cellae substitutum est cum 2 ml completae RPMI 1640 mediae et culturae per 24 horas continuata.Nova cellula media culturae cellulis adiuncta est et incubatis variis temporis punctis secundum primordium designatum.
Dapibus exempla e supernatantibus et lysatibus cellularum sicut antea descriptis parata sunt [25].Membrana translatio parametri pro IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, et eius tag erant 200 mA/90 min.Pro interleukin 1β (IL-1β; Systems R&D, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-I (p20) (Adipogen, Helvetia) et NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Helvetia) et 1:5000 Nisl Tag (Amylet Scientific, Wuhan, China) et β-actin (Proteintech, Wuhan, China).
Crucis-coniunctio cum disuccinimide suberato (DSS) fiebat ut antea [26].Cellae 3 temporibus frigidis PBS ablutae sunt et cum 27 acus iectione in 50 µl ASC reactionem quandam (pH 8.0) continentem 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES et 125 mM NaHCO3.Mixtura centrifugarum 5000 g pro 3 min erat et globulo consüitur cum 10 µl DSS (25 mM in DMSO) et 40 µl ASC reactionem quiddam pro 30 min ad 37°C.Post centrifugationem ad 5000 g pro 10 min, globulo solvebatur in solutione 40 µl motus ASC quiddam ac 10 µl ex 6x interdum loading quiddam (TransGen, Beijing, China), tum solutio exstincta est ad cella temperiei pro 15 min., coque X minuta.Specimina interdum tunc subiecta sunt delendi Occidentis utentibus elementis primariis anti-ASC (Wanleibio, Shenyang, China) ratione dilutionis 1:500.
Post modum antecedentem descriptum [13], cellae culturae supernatantium decerptae sunt et secretio cytokini IL-1β pro-inflammatoriae utens murem IL-1 Beta ELISA cinematographicum (Invitrogen, Thermo Fisher Scientificum).Valores OD450nm converte ad concentrationes interdum in curva norma IL-1β utentes.
Cellulae in operculis obductis leniter 3 temporibus in calidis PBS lavabantur, in textura cellulae fixativae fixae (Biosharp, Beijing, Sinarum) pro 10 min ad cella temperiei (RT), in 0.1% Triton X-Permeabilize ad 100 (dilutum in PBS, Biosharp. ) per 20 minuta ad cella temperatura et impedimentum 5% bovinum serum albuminum (in PBS) pro 2 horis ad locus temperatus.Cellulae tunc incubatae pernoctare in 4°C cum elementis primis contra ASC (1:100 dilutionem) vel NLRP3 (1100 dilutionem), respective, et cy3 intitulatum caprinum anti-lepus IgG(H+L) (1:400; EarthOx , San Francisco, CA, USA) vel caprae FITC-conjugatae anti-mus IgG (1:400; Earthox) pernoctare ad 37°C in obscuro 1 hora.Nuclei Hoechst 33258 maculati sunt (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) per 5 minutas observati sub microscopio fluorescente (Olympus Corporation, Tokyo, Iaponia).
Mures in quattuor circulos dividebantur (n = 7 in singulis gregibus): (i) PBS tractata dicione negativa (PBS tantum; gavagus 100 µl/mus PBS sequitur iniectio intraperitonea cottidiana 100 µl/mus PBS post 3 horas).continuum dies VII);(ii) Circulus inhibitor cum MCC950 contractus negativus [27] (100 µl/mus per PBS gavagum, post horarum 3(iii) G. Infectio cystae duodenalis globi (1.5 x 106 cystae/mus per gulam, post horarum 3, 100 μl/mus PBS intraperitonealiter ministratur cotidie per 7 dies);(iv) G. CYSTA duodenalis infectio coetus inhibitoris contractus MCC950 inhibitoris treatment coetus (1.5×106 anorum/mus per gavagum, 10mg/kg pondus corporis MCC950 intraperitonealiter cotidie per 7 dies ad 3h).Corpus uniuscuiusque muris cotidianum pondus viverra erat et omnes mures die 7 euthanizabantur.Demessum duodenum (3 cm longum) in particulas in 1 ml PBS abscissum est, anorum pernoctare in PBS in 4°C, et G. trophozoites duodenalis.Duodenum recens (1 cm longum) separatim hematoxylinum et eosin (H&E) tinguere.
Mures in duos circulos divisi sunt: ​​(i) LUDIBRIUM imperium caterva (ii) inhibitor catervae MCC950.In utroque coetu curationes quinque fuerunt (n = 7/tractatio coetus): (i) PBS curatio coetus negativus (PBS tantum; 100 µl/mus PBS, intramuscular (IM) iniectio (tibialis anterior) [28, 29] ; ii) pcDNA3.1(+) globus plasmidus coetus negativus (100 μg/mus DNA, via intramuscularis iniectio); globus plasmido pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/mus DNA, intramuscularis iniectio), et (v) coetus cum plasmido pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/mus). DNA, post 12 horas passagii, mures in anno MCC950 inhibitoris globi injectiones intraperitoneales injectiones quotidie MCC950 receptae sunt (pondus corporis 10 mg/kg) per 7 dies, cum mures in MOCK par volumen tractationis PBS acceperunt. Specimina sanguinis erant. a muribus ocelli collecti et pernoctare in 4°C.
Triginta quinque mures in quinque circulos divisi sunt (n=7/group).Societas 1 erat coetus cum PBS potestate negativa tractata: mures 100 µl ex PBS intramusculariter receperunt et post 3 dies per vagum.Group 2 est coetus positive infectus cum G. CYSTA duodenalis: mures cum 100 μl PBS injecti sunt, et post dies 1.5 x 106 anorum/mus intragastrici injecti sunt.Tertius coetus — immunization plasmida cum pcDNA3.1(+) in compositione cum globo moderante infectio CYSTA duodenalis: mures 100 μg plasmidi DNA pcDNA3.1(+)(im) viva voce, 1.5×106 anorum/mus 3 aliquot. diebus.Circuli 4 et 5 recombinantes pcDNA3.1(+) -alpha-2 plasmidum giardinum vel pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 plasmidum giardinum in compositione cum G. infectio duodenalis cystae.Circulus experimentalis: mures 100 µg ex pcDNA3 recipiuntur.1(+) -giardinum plasmidum DNA (im), deinde 3 post dies, 1.5 106 anorum / mus per gavagum infusum est.Corpus uniuscuiusque muris viverra post introductionem G. cystae duodenalis per tubum.Duodenum recens collectum ad mensuras onus parasiticae et IL analysim maculavit.
Mutationes histopathologicae exponuntur secundum modum procedendi prius divulgatum [30].Duodenum recens cum texturae cellulae fixativae fixa, paraffin infixa, in 4 µm sectiones incisa, H&E maculata et sub levi microscopio evolvit.Repraesentativae pathologicae mutationes in septem sectionibus textorum ex septem muribus independentibus aestimatae sunt ab pathologo curationis ignaro et sub 200x magnificatione captae sunt.Longitudo villorum et altitudo cryptarum secundum modos praedictos mensurabantur.
Eventus in vitro et vivo triplicato habiti sunt.GraphPad Prisma 7.00 usus graphi generati sunt (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).Differentiae inter duos circulos per t-test enucleatae sunt, dum differentiae inter ≥3 circulos ab uno modo analysi variationis (ANOVA) per programmatum SPSS enucleatae sunt (versio 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).Data enucleata sunt pro homogeneitate discordantium utens Levene probatio quam sequitur Bonferronius scriptor post hoc experimentum (B).Significatio exprimitur ut P<0.05, P<0.01, et P<0.001 (non significat[ns]) (P>0.05).
Prior nostra analysis GEV proteomicorum in Kyoto Encyclopaedia Geneseos et Genomes (KEGG) ostendit multos clypeos implicari posse in activum inflammatorii signantis meatus [13].Duo scuta pollicentes, alpha-2 et in giardinis alpha-7.3 delegi, has moleculas amplificare et iis uti ad fabricandum vectorem elocutionis pcDNA3.1(+) eukaryotica.Post sequelam, recombinantem pcDNA3.1(+)-alpha-2 et alpha-7.3 plasmida expressio giardina in macrophages peritonaei pri- mus transfigitur, et dapibus 1 p20 subscriptio inflammatio (fragmentum caspase-I reducitur) notum erat. ut elucidans moleculae key quae inflammationem trigger.Eventus ostendit alpha-2 et alpha-7.3 giardines p20 caspase-1 similem expressionem GEV inducere posse.Nullus effectus in activatione caspasi-1 increata potestate negativa (PBS tantum) et plasmida potestate pcDNA3.1(+) inventa est (Figura 1).
Mensuratio p20 caspase-1 activationis per pcDNA3.1(+)-alpha-2 et giardinos alpha-7.3Expressio eukaryotica recombinantis plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 et giardines alpha-7.3 (supra singulos lane) in pri- mus macrophages peritonaei et culturae supernatantes in 24 horis postea desumpti sunt.Western deletio adhibita est ut gradus expressionis scriptionis caspase-1 p20 inflammatiosos metiri posset.Circulus PBS solum curationum (lane C) ac pcDNA3.1(+) coetus monotherapiae (pcDNA3.1 lane) adhibitae sunt ut imperium negativum et coetus curationi GEV pro potestate positiva adhibita.Expressio dapibus recombinantis confirmata est detecta histidine tag in singulis interdum, et cohortes dapibus expectatae giardinae alpha-2 (38.2 kDa) et giardinum alpha-7.3 (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum vesiculae extracellulares, pcDNA3.1(+), vector EcoRV-linearisatus, SUP, supernatans.
Decernere an giardinum alpha-2 et alpha-7.3 giardinum p20 caspase-1 inducat expressionem et munus exerceat ad responsionem inflammationem excitandam NLRP3, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardinam et pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 giardin in macrophages peritonaei pri- mus transfectus est cum plasmido DNA recombinante, et gradibus expressionis, localizationis, et oligomerizationis clavium inflammatoriae servo NLRP3 determinatae sunt.In hoc experimento, GEV sicut coetus positivus controlus adhibitus est, et nulla curatio coetus (PBS tantum) vel pcDNA3.1(+) coetus curationum transfectio erat coetus negativus.Eventus ostendit, sicut in GEV globus, plasmidum DNA recombinantem giardini pcDNA3.1(+)-alpha-2 et giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 in upregulatione NLRP3, pro-IL-1β et procaspase-1 and caspase-1 activation (Fig. 2a).Praeterea ambae giardines inducuntur secretionem significantes IL-1β (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; giardine alpha-2: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0007; ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Figura 2b).Most ASC servolus monomericanus erat in coetus non curationis vel in coetus curationis cum pcDNA3.1(+) plasmidis, contraque pcDNA3.1(+) -alpha-2 vel pcDNA3.1(+)-alpha- 7.3 giardine.ASC oligomerizatio facta est in plasmido recombinante DNA globi vel coetus positivi GEV, ostendens formam oligomericanam (Figura 2 c).Haec praevia notitia suggerunt giardinum alpha-2 et alpha 7,3 giardinum NLRP3 inflammationem movere posse.Subsequens studia immunofluorescentium localisationi ASC et NLRP3 ostenderunt in coetus negativa, dapibus ASC per cytoplasmum dispersos et quasi signum punctum in excitatione pcDNA3.1(+)-alpha-2 cum giardino vel pcDNA3 apparuisse.1(+) -alpha-7,3 coetus giardini vel coetus positivi GEV (Figura 2d).In potestate negativa et pcDNA 3.1 circulos plasmid-tractatos, signum interdum NLRP3 non detectum est, cum signum fluorescens in responsione ad pcDNA3.1(+) -alpha-2 giardinum vel pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 deprehensa est..giardine inveniuntur in cytoplasmo vel excitatione HEV (Fig. 2e).Haec notitia adhuc demonstrant G. duodenalis giardin alpha-2 et giardin alpha-7.3 NLRP3 inflammasome in mus pri- mus macrophages peritonaei movere.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin excitant NLRP3 inflammasome in muris peritonaei macrophages.Recombinans eukaryotica expressio plasmida pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin in macras et cellulas peritonaei primariae murinae, seu supernatantem intra 24 h colligendum pro analysi expressionis, oligomerizationis. secretio.et localisatio clavis inflammatoriae servo.Circulus PBS-tantum (C) coetus ac pcDNA3.1(+) coetus unius curationi adhibiti sunt ut imperium negativum, et coetus curationum GEV sicut coetus positivus adhibebatur.a Clavis inflammatoriae servo NLRP3, incluso NLRP3, pro IL-1β, pro-caspase-1, et caspase-p20 p20, deletione occidentali deprehensa sunt.b Gradus secretionis IL-1β in supernatantibus enzyme connexis immunosorbenti primordium determinati sunt (ELISA).Differentiae inter temperantia et coetus experimentalem analysin variandi (ANOVA) uno modo analysi variatum (ANOVA) per SPSS interretialem versionem 22.0 resolvuntur.Asterisci significant differentias significantes inter circulos **P<0.01 et ***P<0.001.c ASC oligomerizationis gradus in globulos ab DSS analysi connectens determinabantur, cum ASC gradus in lysatibus cellis adhibiti sunt ut imperium loading.d Visualization of ISC localisation utens immunofluorescens.e Immunofluorscentia localisationi NLRP3 ad visualizandam adhibita est.ASC, apoptoticum albugo-sicut interdum;IL, interleukin;NLRP3, nucleotide-obligatio oligomerizatione receptaculo 3 similis;ns, not significantes (P> 0.05)
Utriusque G. duodenalis et GEVs secreta inflammatiosa NLRP3 excitant et exercitum inflammatoriae responsiones in vitro componunt.Ita munus inflammasomum NLRP3 in pathogenicitate G. duodenalis latens manet.Ad hanc quaestionem investigandam, experimentum inter mures infectis G. cystae duodenalis et murium infectis cum G. cysta duodenalis + MCC950 inhibitoris curationi et NLRP3 inflammationem expressionem infectam cum G. cysta duodenali comparavit.Schema accuratum experimenti in Fig. 3 a.Mutationes corporum pondere mures in diversis coetibus curationis viverra per 7 dies post infectionem anorum sunt, et eventus in Fig. 3b monstrantur.Comparato coetui puro PBS tractato, eventus monstravit (i) corpus pondus murium cum G. duodenalis CYSTA minutum a die 3 in diem 7 post infectionem;(ii) Curatio inhibitoris cum MCC950 nullum significantem effectum in murium corpore habuit..Unio globi infectio comparati, BW globi infectio duodenalis cum MCC950 tractata ad varios gradus decrevit (diei 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; Die 2: ANOVA, F(3, 24). ) = 0.4602, P<0.0001; ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; (III, 24)=0.6497, P=0.0645; ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175;Haec notitia demonstrant NLRP3 inflammasome tuendam mures ab insigni pondere damni in primis (2-4 diebus) infectio duodenalis.Nos igitur G. duodenalis trophozoitae deprehendere intendimus in liquore duodenali lavage et eventus in Figura 3 c monstrantur.Infectio globi G. duodenalis cystae comparatus, numerus trophozoitarum in duodenum signanter auctus est post inflammationem NLRP3 interclusam (t(12) = 2.902, P = 0.0133).Textus duodenales cum HE maculatos demonstraverunt, cum potestate negativa tractata cum PBS et MCC950 sola comparata: (i) G. Infectio CYSTA duodenalis in laesione villorum duodenalis consecuta est (ANOVA, F (3, 24)=0.4903, P= 0.0488. ) et cripta atrophia (ANOVA, F(3, 24) = 0,4716, P = 0.0089);(ii) Duodenum a muribus infectis cum G. anorum duodenalis et inhibitoribus tractatum MCC950.duodenales villorum laesi et mortui (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) cum atrophia et crypta ramosa (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. f) .Hi eventus suggerunt NLRP3 inflammasome partes habere in reducendo pathogenicitatem G. duodenalis.
Partes NLRP3 inflammasome in Giardia duodeni infectionis.Mures cum anorum duodenococcalibus defossi sunt et tunc curati sunt vel sine MCC950 (ip).Singulae tractationis coetus cum PBS vel MCC950 adhibitae sunt pro regimine.Circulus experimentalis et curationis regimen.b Corpus pondus murium in singulis coetibus curationis variae per dies VII monitum est.Differentia inter G. infectio coetus duodenalis et G. duodenalis + MCC950 infectio curatio coetus a T-test per versionem programmatum SPSS analysi 22.0.Asterisci differentias significantes indicant *P<0.05, **P<0.01, vel ***P<0.001.c Onus Parasiticum numerum trophozoitarum in lavatione duodenali fluidi computando determinatum est.Differentia inter G. infectio coetus duodenalis et G. duodenalis + MCC950 infectio curatio coetus a T-test per versionem programmatum SPSS analysi 22.0.Asterisci significant differentias in *P < 0.05.d Hematoxylin et eosin (H&E) eventus histopathologiae duodenalis inficiens.Sagittae rubrae damnum villorum indicant, sagittae virides cryptis damna indicant.Scala bar: 100 µm.e, f Statistical analysis of duodenal villus height and mus cryptae altitudo.Asterisci significant differentias significantes *P<0.05 et **P<0.01.Eventus ex 7 experimentis biologicis independentibus sumuntur.pondus corporis BW;ig, partus intragastricae meatus;ip, iter partus intraperitoneale;ns, not significantes (P> 0.05);PBS, phosphate buffered saline;WT, ferox genus
Secretio IL-1β est signum inflammationis activationis.Ad determinare utrum G. giardinum duodenalis et alpha-7.3 giardinum NLRP3 exercitum inflammatiosum in vivo moverent, mures increatos WT mures (globum simulacrum) et NLRP3 inflammatio- nes mures inclusi (MCC950 coetus curatio inhibuit).Schema accuratum experimenti in Fig.Circuli experimentales constiterunt murium curati PBS, G. cystae duodenalis per gavagam, intramuscularem injectionem pcDNA3.1, et intramuscularem iniectionem pcDNA3.1(+) -alpha-2 giardini seu pcDNA3.1-alpha-7.3 giardinae.Die 7 post intramuscularem plasmidis recombinantis administrationem, serum collectum est et libra IL-1β in utroque coetu definitum est.Ut patet in Figura 4b, in Circulo ludibrio: (i) comparato coetui PBS, pcDNA3.1 tractatio nullum effectum significantem in IL-1β secretionis (ANOVA, F (4.29)=4.062, P=0.9998) autem IL-β secretio signanter elevata in G. globi duodenalis cystae (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardini et pcDNA3.1- Iniectio intramuscularis alpha-7.3 giardinum serum IL-1β gradus insigniter auctum (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardinum inductum alti gradus IL -1β secretionis in pcDNA3.1-alpha-2 giardinum intramuscularem injectionem (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333). .Comparatus cum unaquaque caterva in MCC950 curationis coetus et coetus ludibrio: (i) IL-1β gradus secretionis in coetus PBS control et pcDNA3.1 coetus moderatio quodammodo decrevit post obstaculum inhibitoris MCC950, sed differentia non erat. significant (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) obstruxerant MCC950., IL-1β, secretio signanter reducta in G. globi duodenalis cystae infectae, globi giardini pcDNA3.1-alpha-2i, et globi giardini pcDNA3.1-alpha-7.3 (G. duodenalis: ANOVA, F(9) , 58) = 3.540 , P = 0.0120; ) = 3.540, P = 0.0164).Hi eventus suggerunt ut alpha-2 giardinum et alpha-7.3 giardinum activationem inflammasome in vivo NLRP3 mediare.
pcDNA3.1 (+) -giardines NLRP3 exercitum inflammatum in vivo excitant.Mures (IM) immunizati sunt cum expressio eukaryotica recombinante plasmida pcDNA3.1(+) -alpha-2 giardina vel pcDNA3.1(+) -alpha-7.3 giardina et tunc tractata cum MCC950 (ip; MCC950 globus) vel non (coetus phantasticus ).Circulus PBS vel pcDNA3.1 (+) coetus plasmidis adhibita est ut imperium negativum, quo G. CYSTA duodenalis coetus curationi positivi potestate adhibita est.Circulus experimentalis et curationis regimen.b Serum gradus IL-1β muribus mensurati sunt die 7 ab ELISA tentamen.Differentiae inter circulos in grege MOCK uti uno modo ANOVA enucleatae sunt, et differentiae inter catervam ludibrium et coetus MCC950 analysi sunt per versionem programmatum SPSS per experimentum 22.0.Asterisci significant differentias significantes inter coetus curationum in ludo coetus, *P<0.05 et ***P<0.001;signa pupa ($) significant differentias inter singulas catervas in ludibrio et coetus MCC950 in P<0.05.Proventus septem experimentorum biologicorum independens.i, iniectio intramuscularis, ns, non significativa (P> 0.05)
Ad effectum alpha-II et alpha-7.3 mediatae activationis exercitus NLRP3 inflammationis in G. duodenalis infectionitatis investigandi, mures WT C57BL/6 infusi sumus et giardinum alpha-2.3 giardinum infusum.plasmidus intramusculariter injectus, post 3 dies per tubum gastrici G. cystici duodenalis, post quem 7 dies observabantur mures.Schema accuratum experimenti in Fig. 5 a.Corpus uniuscuiusque muris cotidie mensurabatur, exemplaria recentis textus duodeni per tubum gastricum post administrationem VII die colligebantur, numerus trophozoitarum mensurabatur et mutationes histopathologicae observabantur.Ut ostenditur in Figura 5b, crescente tempore pascendi, BW mures in singulis coetus paulatim augentur.Mures MT, die 3 post administrationem anorum duodenalis G. intragastricam decrescere coeperunt et paulatim aucti sunt.Activatio NLRP3 inflammationis inducta per iniectionem intramuscularem giardini alpha-2 et alpha7.3 giardinum pondus damnum in muribus insigniter attenuatum (Die 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardini, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 Dies 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30)=1.399, P=0.9987 Dies 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; Die 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Dies 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.8222, P = 0.0083; , F (4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, dies 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5620, P < 0.0001, DIES 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 dies 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 Dies 6: pcDNA3 .1 - alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, dies 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;dies 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P<0.0001 dies 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P <0.0001).Sarcina parasitica in duodeno (Fig. 5c) aestimata est.Ad imperium positivum increatum comparatum et vectoris pcDNA3.1 globi injecto vacuo, numerus G. trophozoitis duodenalis signanter redactus fuit in circulis giardinis α-2 giardinis et α-7,3 injectis (pcDNA3.1-alpha. -2 giardine : ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P<0.0001).Praeterea alfa-7.3 in muribus magis tutela erat quam alfa giardina-2 (ANOVA, F (3, 24), = 1.209, P = 0.0081).Eventus IL maculans in fig monstrantur.5d-f.Mures cum giardino alpha-2 et alpha-7.3 giardino injecti habebant laesiones duodenales textus pauciores, villo damno manifestati, comparati muribus injectis cum G. duodenalis et muribus injectis cum G. duodenali in compositione cum vectore vacuo pcDNA3 .1 Zoom.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0035 vel P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0028 vel P = 0.0055) cryptae atrophae (pcDNA3.1-alpha-2 giardinae reductae: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 vel P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA , F (3, 24) = 1.470, P = 0.0371 vel P = 0.0191.Hi eventus suggerunt ut giardinum alpha-2 et alpha-7,3 giardinum infectio G. duodenalis minuat, activum NLRP3 inflammatomi in vivo.
Munus pcDNA3.1(+)-giardins in G. infectio duodenalis.Mures (IM) immunes sunt cum expressio eukaryotica recombinante plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardini seu pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine et tunc impugnata cum G. cystis duodenalis (ig).Circulus PBS ac pcDNA3.1(+) + CYSTA curationum duodenarum coetus in coetus dicione negativa adhibiti sunt, et CYSTA curationi duodenalis coetus activitatis positivi adhibitus est.Circulus experimentalis et curationis regimen.b MT Murium in singulis coetibus curationis variae per 7 dies post-provocationem monita est.Asterisci significant differentias significantes inter circulos in G. globi duodenalis et pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardini, *P< 0.05, **P< 0.01, et ***P< 0.001;signum pupa ($) notabilem differentiam indicat inter singulos G. duodenales et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardines globi, $$P<0.01 et $$$P<0.001.c Onus Parasiticum definitum est numerum trophozoitarum in 1 ml lavagii duodeni e duodeni (3 cm longi) computando et ut numerus parasitorum per cm duodeni exprimitur.Differentiae inter G. infectio coetus duodenalis, in pcDNA3.1(+)-alpha-II globum giardinum et pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 globi giardini per unum modum ANOVA evolutae sunt utens SPSS versionis programmalis 22.0.Asterisci significant differentias significantes in **P<0.01 et ***P<0.001.d Histopathologicae mutationes in duodenum.Sagittae rubrae damnum villorum indicant, sagittae virides cryptis damna indicant.Scala bar: 100 µm.e, f Statistical analysis of muris duodenal villus height (e) and crypt height (f).Differentiae inter circulos in Figura 1d uno modo ANOVA enucleatae sunt utens SPSS versionis programmata 22.0.Asterisci significant differentias significantes *P<0.05 et **P<0.01.Proventus septem experimentorum biologicorum independens.ns, not significantes (P> 0.05)
Giardia duodenum est parasitus intestinorum notissimus hominum et aliarum mammalium quae giardiasim creat.Anno 2004, in QUI Neglectis Morbis Initiativi inclusus est, ob suam praevalentiam supra 6 annos, praesertim in communitatibus status ignobilis oeconomicae, subiectus est [32].Systema immune innata munus criticum agit in responsione immune ad G. duodenalis contagio.Muris macrophages nuntiata est ingurgitare et interficere G. duodenalis laqueos extracellulares solvendo [33].Studia nostra priora docuerunt G. duodenalis, parasitum extracellularem non incursum, movere p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, et NLRP3 inflammatoriae vias signare in muris macrophages ut exercitum inflammatoriarum responsionum componat, et GEV dimissum hunc processum augere possit.XIII], XXIV].Attamen, PAMPs accurata in NLRP3 inflammatio-regulata in GEV et partes NLRP3 inflammatiosae in giardiasi elucidandae manent.Ad has duas quaestiones illustrandas, hoc studium deduximus.
NLRP3 inflammasome in cytoplasmo cellularum immunium collocatur et per varias particulas excitari potest ut crystallis urici, toxins, bacteria, virus et parasiti.In studiis bacterialibus toxinae notae sunt clavis PAMPs quae sensores inflammatores excitant, ducens ad inflammationem et mortem cellulae [34].Quaedam structurae diversae toxins, ut hemolysin ex Staphylococcus aureus [35], et Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) ab enterotoxin (NHE) [37] inducunt activum inflammationis NLRP3.Viral studia docuerunt virulentiam proteins sicut SARS-COV-2 involucrum (E) interdum [38] et virus Zika NS5 dapibus [39] magni momenti PAMPs ab NLRP3 receptore agnitum.In studiis parasitis multi parasiti cum exercitu inflammationis activationis sociandum nuntiaverunt, ut Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], et Leishmania [42].In densa granula servo GRA35, GRA42, et GRA43, cum virulentiae gondiorum Toxoplasmi coniungitur, ad inductionem pyroptosis in Lewis rat macrophages requiruntur.Praeterea studia nonnulla Leishmania singula moleculas inflammasmosas in NLRP3 implicatas intendunt, ut membrana parasitica lipophosphoglycan [44] vel zinci metalloproteasis [45].Inter annexin quasi alpha-giardin familiae genesis, alpha-1 giardin ostensum est candidatum potentialem vaccinum esse praesidium contra G. duodenalis in muris exemplar [18].In studio nostro delegimus G. duodenalis rabie factores alpha-2 et giardines alpha-7, quae singularia sunt ad giardia, sed relative minus relata.Haec duo gena clypei in pcDNA3.1(+) eukaryotica expressionis vectoris systematis analysi activitatem inflammationis claudebant.
In exemplari muris nostro, fragmenta caspase adglutinata sunt notae activae inflammationis.In excitanda, NLRP3 cum ASC, tirones procaspases, et caspasas activas generat, quae pro-IL-1β haerent, et pro IL-18 ad IL-1β, IL-18, respective -18.Caspases inflammationes (caspases-I, -4, -5 et -11) conservata sunt familia cysteini protestatum quae criticae sunt ad defensionem innata et in inflammatione et programmatibus cellulae mortis implicantur [46].Caspase I inflammasmos canonicas excitatur, dum caspases-4, -5, et -11 in atypicis inflammasmorum formatione adglutinantur[48].In hoc studio murem peritonaei macrophages musculi usi sumus ut exemplar et investigavimus p20 caspase-1 caspase-1 adhaeserunt sicut titulus exercitus NLRP3 activationis inflammationis in studiis G. infectio duodenalis.Eventus ostendit multos alpha-giardis responsabiles esse activationi inflammationis typicae, quae consentaneum est cum inventione praecipuorum virulentiae moleculis in bacteria et virus implicatis.Sed studium nostrum solum est screen praeliminare et aliae sunt moleculae quae inflammasomes non-classicas movere possunt, sicut studium nostrum priorum tam classicarum quam non-classicarum inflammasomes in G. infectio duodenalis invenitur [13].Ad ulteriora determinare num generatus p20 caspase-1 cum NLRP3 inflammasome coniungitur, nos alpha-2 et alpha-7.3 giardinos in murem macrophages peritonaei definire, ut clavium moleculae interdum expressionis gradus et gradus ASC oligomerizationis gradus evincant, confirmantes utrumque α-giardinum movere. inflammatios NLRP3.Eventus nostri paulo aliter sunt ab illis Manko-Prykhoda et al., qui excitationem cellularum Caco-2 cum G. muris vel E. coli EPEC solas modos augere possunt intensio fluorescentiae NLRP3, ASC, et caspase-I; quamvis non signanter, dum quomodo costimulatio G. muris et E. coli gradus trium servo auctus sit [49].Discrepantia haec esse potest propter differentias speciei Giardiae delectu, lineas cellas et cellulas primarias.Etiam in vivo pertentat utendo ad mures MCC950 in 5-septimana femina WT C57BL/6, quae magis obnoxia sunt G. duodenalis.MCC950 est potens et selectivum moleculae parvae NLRP3 inhibitor qui impedit activationem canonicam et non canonicam NLRP3 apud concentrationes nanomolares.MCC950 inhibet activationem NLRP3, sed activationem AIM2, NLRC4, et NLRP1 meatus inflammationis seu TLR semitas significantes [27] non afficit.MCC950 impedit NLRP3 activationem, sed initiationem NLRP3, K+ effluxum, Ca2+ influxum seu commercium inter NLRP3 et ASC non inhibet;inflammatio- nem inflammatio- nem NLRP3, claudendo ASC oligomerizationem [27].Ergo MCC950 in vivo studio usi sumus ut munus inflammatiosum NLRP3 post giardinam iniectionem determinaret.Activata caspase-1 p10 pro-inflammatoriae cytokini pro-IL-1β inhaeret, et pro IL-18 ad IL-1β, IL-18[50].In hoc studio, Serum IL-1β gradus in giardino-muribus affectis cum vel sine MCC950 adhibita sunt ut index num NLRP3 inflammatiosorum excitata sit.Ut expectatur, curatio MCC950 signanter reducta serum IL-1β gradus.Haec notitia clare demonstrant G. duodenalis giardin alfa-2 et giardin alfa-7.3 posse NLRP3 murem inflammationem movere.
Insignes notitias cumulatas in praeteritum decennium demonstraverunt IL-17A dominum esse regulatorem immunitatis contra G. muris, IL-17RA significans, antimicrobiales peptidas producere et activationem complementum moderari [51].Attamen contagio Giardia frequentius in iuvenibus adultis occurrit, et divulgatum est Giardia contagionem in muribus iuvenibus non movere responsionem IL-17A ad effectum tutelam suam exercendam [52], indagatores ad quaerendum alia Giardia immunomodulatoria impellentes.machinationes Helminthae contagio.Auctores recentis studii nuntiaverunt G. muris NLRP3 inflammasomum ab E. coli EPEC movere posse, quod productionem peptidum antimicrobialium promovet et eius capacitatem adhaesionem minuit et numerum trophozoitarum in tractu intestinali, unde severitatem coloniae minuit. morbi ex bacilli [49].NLRP3 inflammasome in evolutione variorum morborum implicatur.Studia monstraverunt Pseudomonas aeruginosas triggers autophagiam in macrophages ad mortem cellam vitandam, et hic processus pendet ab activatione inflammationis NLRP3 [53].Pro N. caninum, oxygenii reactivum species activationis mediatae NLRP3 inflammationis limites replicationem suam in exercitu, eam facit scopum therapeuticum potentiale [9].Paracoccidioides brasiliensis inventa est ad activationem inflammationem NLRP3 in cellulis mus ossis medullis dendriticis derivatis, inde in emissione cytokini inflammatorii IL-1β, quae munus criticum exercet in defensione hospitis [10].Leishmaniae species complures, inter quas L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, et L. infantum chagasi, NLRP3 et ASC-dependens caspase-1 in macrophages, nec non Leishmania infectio.Replicatio parasitica augetur in muribus deficientibus in NLRP3/ASC/caspase-1 gene [11].Zamboni et al.Leishmania infectio relata est ad activationem inflammatiosorum NLRP3 in macrophages inducere, quod replicationem parasiti intracellularem limitat.Ita Leishmania activationem NLRP3 inhibere potest ut consilium fugae.In studiis vivo, NLRP3 ad inflammationem eliminandam Leishmaniam contulit, sed fibras non afficit [54].Vicissim in studiis helminthiasis, activatio NLRP3 inflammatiosis tutelam hospitii contra helminthiasim gastrointestinalem contra immunitatem suppressit.Shigella est una e praecipuis bacteria diarrhoea causantibus per orbem terrarum.Hae bacteria productionem IL-1β per P2X7 receptorem mediatum K+ effluxum, oxygenii species reactivum, acidificationem lysosomalem, et damnum mitochondriacum inducere possunt.NLRP3 inflammatiose negative phagocytosim et bactericidalum macrophages contra Shigella moderatur[55].Studia Plasmodium docuerunt AIM2, NLRP3 vel caspase-I mures deficientes, cum Plasmodio infectis producere altas gradus 1 generis interfe&ionis magis repugnant Plasmodii contagione [56].Attamen munus alpha-2 giardini et giardini alpha-7.3 inducens activationem pathogenicam NLRP3 inflammationis in muribus obscuram est.
In hoc studio, inhibitio inflammationis NLRP3 a MCC950 BW redacta et numerum trophozoitarum in aqua intestinali liquoris murium auxit, inde gravioribus mutationibus pathologicis in textus duodenali.Giardinum giardinum et alpha-7.3 giardinum mus NLRP3 exercitum excitant inflammasome, murem corporis pondus augent, numerum trophozoitarum in lavacro intestinali fluidi minuunt, et laesiones duodenales pathologicas sublevant.Hi eventus suggerunt G. duodenalis exercitum inflammationem NLRP3 posse per giardinum alpha-2 giardinum et giardinum movere, pathogenicitatem G. duodenalis in muribus reducere.
Collective, eventus nostri demonstrant giardines alpha-2 et 7.3 giardines inflammatiosos NLRP3 exercitum inducunt et infectio G. duodenalis in muribus inducunt.Itaque hae moleculae scuta pro giardiasi praevenienda pollicentur.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: contemplationis.Nuper revelatum est Pat Inflamm allergicum medicamentis esse.MMXIX, XIII: 134-43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: recensio pharmacotherapy.Opinionis periti pharmacopolae.2007;8: 1885-902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis medicamentorum resistentia et inventio novorum scutorum.Disord medicamento scuta inficit.2010;10:295-302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, etc NLRP3 inflammatiosis et inflammatoriis morbis.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. Munus inflammationis intestinae inflammatio et cancer.Gastroenterology.2011;141: 1986-99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonica et atypica NLRP3 activatio inflammatiosa in quadriviis tolerantiae immunis et ventris inflammationis.prae- immunis.2017; 8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-mediata NLRP3 activum inflammatio- num cum responsione ad N. caninum infectionem involvit.Parasitus vector.2020; 13:449.