Gratias tibi ago pro natura.com adire.Versio navigatoris utens quam subsidia limitata CSS habet.Ad optimam experientiam commendamus ut navigatro renovato uteris (vel inactivare Compatibilitas Modus in Penitus Rimor).Interea, ut subsidia continua conservent, locum sine stylis et JavaScript reddemus.
Toxoplasma gondii est parasitus intracellulare protozoanus, qui microenvironmentum hospes infecti modulatur et notum est cum incremento tumoris cerebri incidentiae sociari.In hoc studio, hypothesizamus quod exosomal miRNA-21 ex Toxoplasma infectio tumorem cerebri promovet incrementum.Exosomes e microglia Toxoplasma-infectae BV2 notatae et internitionis cellularum U87 gliomarum confirmatae sunt.Profiles exosomal microRNA expressio expositae usus vestium microRNA et microRNA-21A-5p cum toxoplasmo gondii et tumoris diribitio consociata sunt.Investigavimus etiam variantes gradus genesis tumoris in U87 gliomarum cellularum miR-21 graduum in exosomes immutando et effectum exosomes in glioma cellularum humanarum U87 proliferation.In exosomes cellularum U87 gliomarum cum Toxoplasma gondii infectas, expressio microRNA-21 augetur et actio genesis antitumoris (FoxO1, PTEN, PDCD4) reducitur.BV2 exosomata derivata cum Toxoplasma infectam inducunt multiplicationem cellularum U87 gliomarum.Exosomes incrementum cellularum U87 in exemplar muris tumoris inducunt.Monemus auctum exosomal miR-21 in microglia Toxoplasma-infectis BV2, munus magni momenti agere potest sicut incrementum cellae promotoris in U87 gliomae cellulis per antitumorem genes downregulando.
Aestimatur plus quam 18.1 miliones casus cancri provectioris terrarum anno 2018 dignosci, cum circa 297,000 tumores centrales systematis nervosi quovis anno dignoscantur (1.6% omnium tumorum)1.Prior investigationis ostendit factores periculi ad explicandum tumores cerebri humanos varios fructus chemicorum, historiae familiaris, et radiorum ionizing capitis apparatum therapeuticum et diagnosticum.Sed causa exacta harum malignitatum ignoratur.Proxime XX% omnium carcinomata terrarum ab agentibus infectiosis causantur, inclusa virus, bacteria et parasites3,4.Infectiosa pathogens exercitum cellae mechanismi geneticae perturbare, sicut DNA reparationem et cyclum cellularum, et inflammationem chronicam et damnum ad systema immune ducere potest.
Agentia infectiosa cum cancro humano associatur sunt frequentissima pathogens viralis, inclusa papillomavirorum humanorum et virus hepatitis B et C.Parasitae etiam partes potentiales agere possunt in evolutione cancri humani.Plures species parasiti, nempe Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis et Hymenolepis nana, variis generibus canceris humani implicati sunt 6,7,8.
Toxoplasma gondii est protozoan intracellulare quod microenvironmentum cellularum hospitii infectae moderatur.Hic parasitus circiter 30% incolarum mundi inficere aestimatur, totam multitudinem periculo9,10.Toxoplasma gondii organa vitalia, inter systema nervosum centrale (CNS), inficere potest et graves morbos causare sicut meningitis fatalis et encephalitis, praesertim in aegris immunocompromised.Nihilominus, Toxoplasma gondii etiam ambitum hostiae infectae mutare potest per incrementum cellularum modulans et responsiones immunes in individuis immunocompetentibus, ducendo ad infectionem asymptomaticae chronicae conservandam 9,11.Interestingly, relatio inter T. gondii praevalentiam et tumorem cerebri incidentiae, nonnullae relationes suggerunt in vivo exercitui mutationes environmental ob infectio chronica T. gondii similes tumori microenvironmentorum.
Exosomes notae sunt communicatores intercellulares qui contentos biologicos, inclusos servo et acida nucleica, e cellulis vicinis XVI, 17. liberant.Exosomes possunt processus tumoris relatos biologicos movere sicut anti-apoptosis, angiogenesis et metastasis in microenvironment tumore.Praesertim miRNAs (miRNAs), parvae RNAs nucleotides non-coding circiter 22 nucleotides in longitudine, magni momenti sunt regulatores generum transscriptionalium qui plus quam XXX% hominum per mRNA continentes per miRNA-imducti complexum silentium (miRISC).Toxoplasma gondii processus biologicos perturbare potest, miRNA expressionem moderans in exercitibus infectis.Militiae miRNAs magna signa continent ad processuum biologicum exercitum moderandum ut consilii salvos parasiti perficiat.Ita studens mutationes in miRNA profile hospitii in contagione cum T. gondii adiuvari potest nos intellegere commercium inter exercitum et T. Gondii clarius.Immo Thirugnanam et al.15 suadet quod T. gondii carcinogenesis cerebrum promovet mutando suam expressionem in speciali miRNAs hospes cum incrementi tumore associatus et invenit T. gondii gliomas in animalibus experimentalibus causare posse.
Hoc studium in alteratione exosomal miR-21 tendit in microglia hospes cum Toxoplasma BV2 infecta.Observavimus partes possibilis miR-21 exosomal mutatae in incremento cellarum U87 gliomarum ob retentionem in nucleo FoxO1/p27, qui est scopus expressus miR-21.
Exosomes ex BV2 derivatis utentes centrifugationem differentialem consecuti sunt et variis modis roborati ne contagione cum elementis cellularibus vel aliis vesiculae convalescerent.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ostendit distincta exemplaria inter servo e cellulis BV2 et exosomes extractis (Figura 1A), et exempla pro Alix praesentia aestimata, quae per Occidentalem deletionem interdum figentium exosomal in evolvit.Alix labelingum in exosomis proteinis sed non in cellulis lysatis servo BV2 repertum (fig. 1B).Praeterea RNA purgata ab exosomes ex BV2 derivatis per bioanalyzer analysi est.18S et 28S subunitae ribosomales raro in exemplari migrationis exosomal RNA observatae, certissimam puritatem indicantes (Figura 1C).Denique transmissio microscopia electronica ostendit observata exosomes magnitudine circiter 60-150 um esse et poculum similem structuram morphologiae exosomatae typicam habuisse (Fig. 1D).
Characterisatio exosomes ex cellulis BV2 derivatis.(A) Salutis pagina data scheda.Protemina separatim a cellulis BV2 vel exosomes ex BV2 derivatis.Exempla interdum inter cellas et exosomes differunt.B) Occidentalis macula analysis exosomalis (Alix).(C) Aestimatio purgati RNA ex cellulis BV2 et BV2 exosomes derivatis utens bioanalyzer.Ita 18S et 28S subunita ribosomalia in BV2 cellulis raro inveniuntur in RNA exosomal.(D) Microscopia transmissio electronica ostendit exosomes ab cellulis BV2 segregatos negative acetate 2% uranyl maculatos esse.Exosomes sunt circiter 60-150 um magnitudine et cyatho-formata (Canticum et Jung, notitia inedita).
Internus cellularis ex BV2 exosomes derivatis in U87 cellularum humanarum gliomarum usus microscopio confocal observatus est.PKH26 exosomes intitulatum in cytoplasmo cellularum U87 collocantur.Nuclei DAPI maculati sunt (fig. 2A), significans BV2 exosomes derivatos posse ab hospite cellulis interniri et influere ambitum cellularum recipientium.
Internazatio BV2 exosomes derivatorum in cellulas gliomas U87 et BV2 exosomes derivatas infectas cum Toxoplasma RH inducta multiplicatione cellularum U87 gliomarum.(A) Exosomes cellulis submersis U87 microscopio confocal mensuratis.U87 cellae gliomatae cum exosomes cum PKH26 (rubris) vel sine 24 horis inclusae sunt.Nuclei DAPI (blue) inquinati sunt et sub microscopio confocali observati (scala: 10 µm, x 3000).(B) U87 glioma cellulae multiplicatio per cellam multiplicationem primordium definita est.U87 glioma cellulae exosomes tractata sunt tempore indicato. *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P < 0.05 ab discipulo scriptor test. *P < 0.05 t *P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 nactus per experimentum studentis.
Postquam internumizationem BV2-exosomorum in U87 glioma cellularum derivatorum confirmavimus, multiplicationem cellam peragimus ad investigandum munus BV2 Toxoplasmatis derivatae exosomatum in evolutione cellarum humanarum.Curatio cellularum U87 cum exosomes ex cellulis T. gondii-infectis BV2 demonstravit T. gondii-exosomatum infecta BV2 exosomatum signanter altiorem prolificationem cellularum U87 ad imperium comparatas effecit (fig. 2B).
Praeterea incrementum cellularum U118 eosdem eventus habuit ac U87, cum Toxoplasma exosomatum excitavit summos gradus proliferation (notitia non ostensa).Ex his indiciis, significare possumus Toxoplasma-exosomatum pestilentiae derivatum in glioma cellularum multiplicatione munus magni momenti agere.
Ad effectum Toxoplasma-infectae BV2 exosomes in tumorem evolutionis derivatum investigandum, U87 gliomas cellulas in mures nudas ob exemplar xenografi infusum et exosomatum BV2 derivatum vel exosomatum RH-infectium BV2 derivatum.Post tumores apparuerunt post hebdomadem 1 , uterque coetus experimentalis 5 murium secundum tumorem magnitudine ad idem principium determinandum divisus est, et tumor amplitudo per 22 dies mensurata est.
In muribus cum exemplare xenografii U87, insigniter maior tumor magnitudinis et ponderis, observatus est in caterva RH-exosome infectis in die 22 (Fig. 3A,B).Ex altera parte, nulla notabilis differentia erat in magnitudine tumoris inter coetus BV2-exosome derivatos et post curationem exosome coetus moderatio.Mures praeterea cum cellulis gliomatibus et exosomes injecti maximum volumen tumori in globo exosomatum RH-infecti BV2-exosomorum derivatorum visibile ostenderunt (Fig. 3C).Hi eventus demonstrant BV2 derivata Toxoplasma exosomes infecta glioma incrementum in exemplar muris tumoris inducere.
Oncogenesis (AC) exosomes BV2 derivata in exemplari xenografo U87 mus.Magnitudo tumoris (A) et pondus (B) signanter aucta sunt in BALB/c mures nude curati cum exosomes RH-infectis ex BV2.BALB/c mures nudi (C) injecti sunt subcutanee cum cellulis 1 x 107 U87 in mixtione Matrigel suspensis.Sex diebus post iniectionem, 100 μg ex BV2 derivata exosomata in muribus tractata sunt.Tumor magnitudine ac pondere per dies indicatos emensus et post sacrificium resp. *P < 0.05. *P < 0.05. *Р < 0,05. *P < 0.05. *P < 0.05。 *P < 0.05。 *Р < 0,05. *P < 0.05.
Notitia monstravit 37 miRNAs (16 expressas et 21 expressas) cum immunitate vel tumore evolutionis sociatas signanter mutatas esse in microglia post infectionem cum Toxoplasma RH eliquato (Fig. 4A).Relativa expressionis gradus miR-21 inter miRNAs mutatos confirmata sunt in exosomes ex BV2, exosomes BV2 et U87 cellulis reali tempore RT-PC deductis.Expressio miR-21 notabile incrementum in exosomes ex cellulis BV2 cum Toxoplasma gondii (RH contentis) infectis ostendit (fig. 4B).Relativa expressionis gradus miR-21 in BV2 et U87 cellulis auctis post susceptionem exosomes alteratorum (fig. 4B).Relativi gradus miR-21 expressionis in fibris cerebri tumoris aegros et murium cum Toxoplasma gondii infectis (ME49 iactandis) altiores erant quam in regimine, respective (fig. 4C).Hi eventus referunt differentias inter gradus expressionis praedictarum et confirmatarum microRNAs in vitro et vivo.
Mutationes expressionis exosomal miP-21a-5p in microglia cum Toxoplasma gondii infectae (RH).(A) Demonstrat notabiles mutationes in sirna cum immunitate vel tumore progressu sequenti T. gondii RH infectio consociata.(B) Relativa miR-21 gradus expressionis real-time RT-PCR in BV2 exosomes, BV2 exosomes tractata, et U87 detecta sunt.(C) Relativa miR-21 gradus expressionis in fibris cerebri tumoris aegros (N=3) et mures cum Toxoplasma gondii (Me49 iactando) infecti sunt (N=3). *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия тьюдента. *P < 0.05 utens discipulo scriptor test. *P < 0.05 t *P < 0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 nactus per experimentum studentis.
Exosomes ex cellulis RH-infectis BV2 ad gliomas in vivo et in vitro incrementum deductis (Fig. 2. 3).Ad mRNAs pertinentes deprehendere, investigavimus mRNA gradus antitumoris scopo geneseos, capsulae fork capitis O1 (FoxO1), PTEN, et programmatum cellae mortis 4 (PDCD4) in U87 cellulis exosomes ex BV2 vel RH BV2 infectis.Analysis bioinformaticae varias genesis tumor-associatas, inclusas genesis FoxO1, PTEN, et PDCD4 ostendit, situs ligandi miR-2121,22 ostendit.mRNA gradus antitumoris scopo genesis reducti sunt in RH-infectis BV2 exosomes derivatis comparatis exosomes BV2 derivatis (Fig. 5A).FoxO1 ostendit dapibus reductis in RH-infectis BV2 exosomes derivatis comparatis exosomes BV2 derivatis (Figura 5B).Ex his eventibus confirmari possemus exosomes ex RH-infectis BV2 descensiones anti-oncogenicas genesis ortos, eorum partes in incrementi tumore sustinentes.
Toxoplasma RH-infecta BV2 exosomes derivata suppressionem genesis antitumoris in U87 cellulis gliomatum per Toxoplasma RH-exosomatum infectis BV2 derivatis.(A) Tempus reale PCR e FoxO1, PTEN et PDCD4 expressum in exosomes ex T. gondii RH pestilentiae BV2 comparatis exosomes PBS.β-actin variant usus est pro potestate.(B) FoxO1 expressio Occidentalis delendi et densitometriae notae definita erant peraeque aestimatae programmatis ImageJ utentes. *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0.05 per experimentum studentis adeptus est. *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия тьюдента. *P < 0.05 utens discipulo scriptor test. *P < 0.05 t *P < 0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 nactus per experimentum studentis.
Ad effectum miP-21 in exosomes de tumore associato generum ordinatio, U87 cellulae cum inhibitore miP-21 utens Lipofectamine 2000 transfigitur et cellulae 24 horarum post translationem decerptae sunt.FoxO1 et p27 gradus expressionis in cellulis cum miR-21 inhibitoribus transfixis comparati sunt cellulis exosomes derivatis BV2 tractatis utentes qRT-PCR (Fig. 6A,B).Transfectio miR-21 inhibitoris in cellas U87 signanter regulatas FoxO1 et p27 expressas (FIG. 6).
RH pestilentiae exosomal BV2 derivatae miP-21 mutatae FoxO1/p27 expressio in cellulis glioma U87.U87 cellulae cum miP-21 inhibitore adhibito Lipofectamine 2000 traductae sunt et cellulae 24 horarum post perfectionem decerptae sunt.FoxO1 et p27 gradus expressionis in cellulis cum miR-21 inhibitoribus transfixis comparati sunt ad gradus in cellulis cum exosomes derivatis BV2 tractatis utentes qRT-PCR (A, B).
Ut immune responsum hospiti effugeret, parasitus Toxoplasma in cystam texti transformat.Varias telas parasitificant, etiam cerebrum, cor, et musculus osseus, in vita exercitus, et immune responsum exercitus modulantur.Praeterea cyclum cellularum et apoptosin cellularum hospitalium moderari possunt, earum proliferation 14, 24. promovere.Toxoplasma gondiorum praecipue cellas dendriticas, neutrophillas, et genus monocyte/macrophagi, inter microglia cerebri, praecipue inficit.Toxoplasma gondii differentiam macrophages M2 phaenotypi inducit, vulnus sanationis post contagionem pathogeni afficit et etiam cum hypervascularizatione et fibrosi granulomato sociatur.Haec pathogenesis morum infectio Toxoplasmatis referri potest ad venalicium cum progressu tumoris consociata.Ambitus hostilis a Toxoplasmo regulatus fortasse precanti correspondenti similis est.Ideo sumi potest quod Toxoplasma infectio conferat ad tumores cerebri evolutionis.Re vera, altae infectiones rates Toxoplasmae in serum aegrorum variis tumoribus cerebri nuntiatae sunt.Praeter, Toxoplasma gondii potest esse alius effector carcinogenicus et synergistice agere ut adiuvet alios carcinogenos infectiosos tumores cerebri augendi.Hac de re notatu dignum est P. falciparum et Epstein-Barr virum synergistice ad formationem lymphoma Burkitt conferre.
Munus exosomes sicut regulatores in campo investigationis cancri late exploratae sunt.Attamen munus exosomes inter parasitos et catervas infectas male intellectas manet.Hactenus, variae regulatores, inclusis servo secretis, processus biologicos explicaverunt, quibus parasiti protozoani resistunt oppugnationi et contagione perpetuant.Nuper notio crescens facta est ut microvesiculae protozoan-associatae et eorum microRNAs cum cellulis hospites inter se cohaereant ut prosperum environment propter salutem suam efficiant.Propterea ulterius studia necessaria sunt ut relationem inter miRNAs exosomal et glioma cellularum multiplicationem mutatam detegant.MicroRNA alteratio (botrus genes miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 et miR-17-92) ad STAT3 promotorem in toxoplasmatibus macrophages humanis infectis obligat, regitur et inducit. -apoptosis in responsione ad Toxoplasma gondii contagio 29 .Toxoplasma infectio auget expressionem miR-17-5p et miR-106b-5p, quae pluribus morbis hyperproliferatis coniungitur 30 .Haec notitia suggerunt exercitum miRNAs a contagione Toxoplasma regulari moleculae magni momenti esse ad parasitum superstes et pathogenesis in exercitiis biologicis moribus.
Mirnas varias mores movere potest in initiatione et progressu cellularum malignarum, inter gliomas: auto-sufficientiam incrementi significationum, insensibilitas ad incrementum inhibitorum significationum, apoptosis evasionis, potentiae illimitatae replicativae, angiogenesis, incursio et metastasis et inflammatio.In glioma, miRNAs mutatae in pluribus studiis multiplicandis notati sunt.
In praesenti studio confirmavimus gradus excelsos miRNA-21 expressionis in cellulis hospes toxoplasma pestilentiae.miR-21 notus est unus e microRNAs frequentissimis tumoribus solidis, incluso gliomas, 33 notus est et eius expressio cum gliomae gradu cohaeret.Cumulus probationes suggerit miR-21 novam esse oncogenam quae tamquam factor anti-apoptoticus in glioma incremento agit et in texturis et plasma cerebri hominis malignitates valde exprimitur.Interestingly, miR-21 inactivatio in cellis gliomatibus et textibus triggers inhibitionem multiplicationis cellae propter apoptosin caspase-dependens.Analysis bioinformatica miR-21 scutorum praedicta patefacta multiplex tumor suppressoris genesis cum apoptosis tramitibus coniungitur, incluso programmatibus cellae mortis 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, et arca fork capitis O1 (FoxO1), cum miR-2121 situs ligandi..22.38.
FoxO1, sicut unus e factoribus transcriptionis (FoxO), in evolutione cancri humani varias involvit, et expressionem tumoris suppressoris genesis moderari potest, ut p21, p27, Bim, et FasL40.FoxO1 ligare et cyclum cellularum inhibitores movere possunt ut p27 ad incrementum cellularum supprimendum.Praeterea FoxO1 clavis est effector PI3K/Akt significans multos processuum biologicos et moderans ut progressionis cycli cellularum et differentiationis cellularum per transcriptionis activationem p2742.
Demum credimus exosomalem miR-21 e microglia Toxoplasma pestilentiae derivatum posse munus magni momenti esse ut incrementum moderatoris cellularum gliomarum (fig. 7).Attamen studia ulteriora requiruntur ut nexus directus inter miR-21 exosomalem, toxoplasma infectio mutatus et incrementum glioma inveniatur.Hi eventus expectantur initium praebere ad investigandum relationem inter Toxoplasma contagione et glioma incidentia.
Schematismum schematicum de mechanismo glioma (cerebri) carcinogenesis in hoc studio proponitur.Auctor in PowerPoint 2019 trahit (Microsoft, Redmond, WA).
Omnia experimentalia protocolla in hoc studio, inclusa animalium usu, secundum Seoul National University Animal Care and User Committee Standard Ethical Guidelines et probatae sunt a Recensione institutionali Tabula de Seoul National University School of Medicine (IRB number SNU- 150715).-2).Omnes rationes experimentales factae sunt secundum commendationes ADVENIO.
BV2 mus microglia et U87 cellulae humanae gliomatae in Dulbecco mutatae in Medio Aquilae (DMEM; Welgene, Seoul, Corea) et Roswell Park Memorial Instituti Medii (RPMI; Welgene), singulae in quibus continentur 10% foetus bovinum serum, 4 mM l. glutamine, 0.2 mM penicillinum et 0.05 mM streptomycin.Cellulae in incubatore excultae sunt 5% CO2 ad 37°C.Alia linea glioma cellula U118 adhibita est ad comparationem cum cellulis U87.
Exosomatum segregare ex T. gondiis infectis RH et ME49 modis, T. gondii tachyzoitis (RH strain) ex abdominis cavitate 6-septimanis BALB/c injectis muribus ante diebus 3-4.Tachyzoites ter cum PBS ablutus est et centrifuga in 40% Percoll purificatus est (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Ad contentionem tachyzoitis ME49 obtinendam, mures intraperitonee injecti sunt cum anorum XX texturae et tachyzoitae transformationis in cystas collectae lavando cavitatis abdominis die VI post infectionem (PI).Muribus infectis PBS.ME49 tachyzoites creverunt in cellulis penicillinis cum 100 μg/ml suppletis (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycinum (Gibco/BRL), et 5% foetus serum bovinum (Lonza, Walkersville, MD ) .., USA) ad 37 °C et 5% dioxydum carbonii.Post culturam in Vero cellulis, ME49 tachyzoitae bis per acum METIOR 25 transierunt et deinde per 5 µm sparguntur ad strages et cellulas removendas.Post lavationem, tachyzoitae resuscitati sunt in PBS44.TEXTUS cystae Toxoplasmatis gondii colendi ME49 conservatae sunt ab injectione cystarum intraperitonealium a cerebro murium infectae C57BL/6 separatae (Orient Bio Animal Centre, Seongnam, Corea).Cerebra murium ME49-infectis post 3 menses PI decerpta et sub microscopio tritum ut anorum segregatorum.Mures infecti sub specialibus condicionibus liberorum pathogen (SPF) custodiebantur apud Scholam Medicinae Nationalis Universitatis Seoul.
Totalis RNA extracta est ex BV2 exosomes derivatis, cellulis et textibus BV2 utentibus miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germania) secundum instructiones fabricae, incubationis incluso tempore ad gradum elutionis.RNA concentratio in NanoDrop 2000 spectrophotometris constituta est.Qualitas RNA microarrays aestimata est utens Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, in Belgio).
DMEM cum 10% exosome-pauper FBS paratum est ultracentrifugationem ad 100,000g per 16 horas ante 4°C et percolatur per 0.22 µm colum (Nalgene, Rochester, NY, USA).Cellae BV2, 5 105, in DMEM excultae sunt, continentibus 10% exosome-leuentibus FBS et 1% antibioticis 37°C et 5% CO2.Post 24 horas incubationis, tachyzoites canendi RH vel ME49 (MOI = 10) ad cellulas et parasiti non-ingredientes intra horam ablati sunt et replentur cum DMEM.Exosomes ex cellulis BV2 a centrifuga differentiali modificato, methodo quam late adhibito, separatae sunt.Resuspende globulo exosome in 300 µl PBS pro RNA vel analysi interdum.Concentratio exosomerum solitarum definita est utens ornamentum dapibus primordium BCA (Pierce, Rockford, IL, USA) et NanoDrop 2000 spectrophotometris.
Praecipitationes ex cellulis BV2 vel exosomes ex BV2 derivatis in PRO-PREP™ solutione extrahendi interdum (iNtRon Biotechnologia, Seongnam, Corea) et proteins in Coomassie splendidae caeruleae maculatae 10% SDS polyacrylamide gelatae onerati sunt.Praeterea servo PVDF membranis 2 horis translati sunt.Western deletiones convalidatae sunt utentes Alix anticorpus (Cell Signaling Technologia, Beverly, MA, USA) ut titulum exosomal.HRP hircus-conjugatus anti-mus IgG (H + L) (Bethyl Laboratorium, Montgomery, TX, USA) et LAS-1000 imaginis plus lucidi analysi (Fuji Film Photographic, Tokyo, Iaponia) usi sunt ut anticorpus secundarium..Microscopia transmissio electronica facta est ad studium magnitudinis et morphologiam exosomes.Exosomes ab cellulis BV2 separatis (6.40 µg/µl) parabantur in reticulis carbo-coclatis et negative acetate 2% uranyllis pro 1 min maculatis.Exempla praeparata observata sunt in intentione accelerans 80 kV utentis JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) instructa camera ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
BV2 exosomes derivatae maculatae sunt utentes PKH26 Red Fluorescent Linker Ornamentum (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) per 15 minuta ad cubiculi temperiem.U87 cellulae 2×105, cum PKH26-exosomes (rubris) vel nulla exosomes in potestate negativa, incubata sunt 37°C per 24 horas in incubatore 5% CO2.U87 nuclei cellulae DAPI (blue), U87 cellulae in 4% paraformaldehyde fixae erant pro 15 min ad 4°C et deinde in Leica TCS SP8 STED CW systematis microscopii confocal (Leica Microsystems, Mannheim, Germania enucleata).notabilis.
cDNA e siRNA summatim utens Mir-X siRNA primum synthesin filum et SYBR qRT-PCR ornamentum (Takara Bio Inc., Shiga, Iaponia).Tempus reale quantitatis PCR fiebat utens iQ5 tempore reali PCR detectionis systematis (Bio-Rad, Herculis, CA, USA) utens primers et templates cum SYBR Premix mixto.DNA ampliatum est per 40 circuitus denaturationis ad 95°C pro 15 s et furnum ad 60°C pro 60 s.Data e singulis PCR reactionis est analysi utens analysi moduli iq™ 5 ratio programmatis optici (Bio-Rad).Relativae mutationes in gene expressionis inter scopum electum genesis et β-actin/siRNA (et U6) mensurae curvae methodo utentes sunt.Sequentiae priores usus in Tabula 1 monstrantur.
3 x 104 U87 cellulae gliomae in 96-bene bracteis sparsae et cum toxoplasmo pestilentiae exosomes ex BV2 deductis (50 μg/mL) vel exosomes non pulsibus ex BV2 (50 μg/mL) derivatis ut moderantur ad 12, 18 et 36 horarum .Cellula proliferation rate definita est utens Cellae Computantis Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Iaponia) (Figurae S1-S3) 46 .
5 octo-vetus femina BALB/c nudi mures ab Oriente Bio (Seongnam-si, Corea Meridionalis) empti sunt et in caveis sterilibus in cella temperie (22±2°C) et humiditate (45± 15°C) singulariter tenentur.%) ad locus temperatus (22±2°C) et humiditas (45±15%).Lumen cyclum horarum 12 et 12 horarum cycli obscuri fiebant sub SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).Mures passim in tres partes 5 murium singuli et singuli coetus injecti sunt subcutanee cum 400 ml PBS continentibus 1 x 107 U87 cellulas gliomas et factor incrementi BD Matrigel™ redactos (BD Science, Miami, FL, USA).Sex diebus post iniectionem tumoris, 200 mg exosomatum ex cellulis BV2 (cum/sine contagione Toxoplasmatis) in tumorem situm injectae sunt.Post viginti et duos dies infectio tumoris murium in utroque coetu tumor murium ter in hebdomada mensuratus est, et volumen tumore computavit formula: 0.5× (latitudo) ×2× longitudo.
MicroRNA analysis expressio miRCURYTM LNA miRNA utens ordinata, 7th generatio habet, mmu et rno vestit (EXIQON, Vedbaek, Dania) 1119 mures inter 3100 humanos, murem et rat miRNA captas rimatur.In hoc processu, 250 ad 1000 ng totalis RNA ab 5′-phosphate remotum est curatione phosphatae intestinalis vituli alkalini quam sequitur labellum cum fuco Hy3 viridis fluorescentis.Specimina intitulata tunc hybridizata sunt per onerationis microarray labitur utens ornamentum cubiculi hybridizationis (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) et ornamentum lapsus hybridizationis (Agilent Technologies).Hybridization peracta est per 16 horas ante 56°C, tunc microarrayae ablutae sunt pro commendatione fabricatoris.Processus microarray labitur tunc lustratus est utens systematis agilentis G2565CA microarray scanner (technologiae agilent).Imagines lustratae advectae sunt utens 10.7.3.1 (Agilent Technologies) et fluorescens vehementia cuiusque imaginis, quanta erat utens lima GAL correspondente protocolli mutationis Exiqon.Microarray notitia pro currenti studio repositae sunt in datorum GEO sub accessione numeri GPL32397.
Locutio profile maturae miRNAs exosomales in microglia de RH vel ME49 modos cum Toxoplasmate infectis per varias retis instrumenta enucleatae sunt.miRNAs evolutionis tumori consociatae utentes miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) coniunguntur et eliquatae sunt cum intensione normali (log2) maior quam 8.0.Inter miRNAs, differentialiter miRNAs expressas, inventae sunt plus quam 1.5-triplex, mutato analysi miRNAs a RH vel ME49 modis infectis cum T. gondiis mutatis.
Cellulae in sex lamellis bene seminatae (3 x 105 cellulis/bene) in opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) utentes Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).Cellulae transfunctatae per 6 horas excultae sunt et tunc media commutata est in novum medium completum.Cellulae de exitu 24 horarum post translationem.
Analysis statistica maxime fiebat utens discipulorum experimentum cum programmate Praecedo (Microsoft, Washington, DC, USA).Ad analysim animalis experimentalem, duplex via ANOVA fiebat utens Prismate 3.0 programmatis (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). P-valores < 0.05 peraeque notabiles habitae sunt. P-valores < 0.05 peraeque significantes habiti sunt. начения P <0.05 считались статистически начимыми. P valores <0.05 peraeque significantes habiti sunt. P < 0.05 P < 0.05 начения P <0.05 считались статистически начимыми. P valores <0.05 peraeque significantes habiti sunt.
Omnia protocolla experimentalia in hoc studio adhibita approbata sunt ab Institutione Recognoscendi Tabula Academica Scholae Medicinae Nationalis Seoul (IRB number SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Aestimatur cancer globalis incidentiae et mortalitatis in 2018: Fontes et methodi GLOBOCAN.Interpr.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Perspectio in periculo factorum tumorum cerebri eorumque interventus medicinales. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Perspectio in periculo factorum tumorum cerebri eorumque interventus medicinales.Rashid, S., Rehman, K. et Akash, MS A recensio periculorum factorum pro tumoribus cerebri et intervenientibus maioribus therapeuticis. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Alta intellectus tumore periculo factores et interventus medicinales.Rashid, S., Rehman, K. et Akash, MS A recensio periculorum factorum pro tumoribus cerebri et intervenientibus maioribus therapeuticis.Scientiae biomedicae.Pharmacopola.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Interationes bacterial-virales in carcinomatis orodigestivi et feminini tractus genitalis: Summa epidemiologicae et laboratorii argumenti. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Interationes bacterial-virales in carcinomatis orodigestivi et feminini tractus genitalis: Summa epidemiologicae et laboratorii argumenti.Kato I., Zhang J. et Sun J. Interationes bacterial-virales in cancro tractus gastrointestini humani et tractus genitalis feminini: summa epidemiologica et laboratoria data. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. -病毒相互作用：流行病学和实验室证据总结。 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bacterio-viralis commercium in cavitate oris humani digestio et tractum generationis feminae: compendium scientiae popularis morborum et laboratorium testium.Kato I., Zhang J. et Sun J. Bacterial-viralis interactiones in cancro gastrointestino humano et cancro genitali feminino: summa epidemiologica et laboratoria data.Cancri 14, 425 (2022).
Magon, KL & Paroecia, JL Ab infectione ad cancri: Quomodo DNA virus cinematographicum cellam centralem carbonis et metabolismi lipidi mutabit. Magon, KL & Paroecia, JL Ab infectione ad cancri: Quomodo DNA virus cinematographicum cellam centralem carbonis et metabolismi lipidi mutabit.Mahon, KL et Paroecia, JL Infectio ignis cancri: quomodo DNA-substructio virus pituitae exercitum cellam centralem carbonis et metabolismi lipidi mutant. Magon, KL & Parochia, JL DNA . Magon, KL & Paroecia, JL Ab contagione ad cancer: quomodo DNA virus evulsum exercitum cellam carbonis centralis et metabolismi lipidi mutabit.Mahon, KL et Paroecia, JL Incendia contagione cancri: quomodo DNA virus virus centrale carbonis et lipidi in cellis hospitibus mutant.Open Biology.11, 21000 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Catechola estrogens de schistosomes et hepatis fluclibus et cancri helminthis associatis.frons.intus calidum.5, 444 (2014).